DESARROLLO DE UNA METODOLOGÍA POR CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSIÓN MOLECULAR PARA LA DETERMINACIÓN DE POLIRRIBOSIL-RIBITOL-FOSFATO (PRP) LIBRE Y CONJUGADO A TOXOIDE TETÁNICO (PRP-TTD) EN VACUNAS ANTI HAEMOPHILUS INFLUENZAE TIPO B
Development of a size exclusion chromatography method for a determination of free polyribosyl-ribitol-phosphate (PRP) and conjugated to tetanus toxoid (PRP-TTD) in Haemophilus influenzae type B vaccines
Revista Científica ANMAT; 2 (Año 5), 2021
Publication year: 2021
Haemophilus influenzae tipo b es un patógeno oportunista responsable de infecciones invasivas y graves como bacteriemia
y meningitis bacteriana aguda en poblaciones susceptibles, principalmente en niños menores de 5 años de edad. Su antígeno
capsular, el polirribosil-ribitol-fosfato, es un polisacárido específico del serotipo b y ha sido utilizado para la producción de vacunas,
inicialmente en forma aislada, con escaso éxito debido a la pobre estimulación inmune en la población objetivo, dando una protección
poco sostenida en el tiempo. Surgieron así las vacunas conjugadas, usadas actualmente, donde el polisacárido capsular se une a
una proteína carrier para generar una respuesta inmune timo-dependiente, con memoria inmunológica, y apta para el uso en niños
a partir de los 2 meses de edad. El polirribosil-ribitol-fosfato se caracteriza por ser una secuencia polimérica del azúcar fosfatado
de largo variable, formando una mezcla con diferente abundancia de pesos moleculares. El largo de las cadenas polisacarídicas es
un parámetro de calidad del proceso productivo de estas vacunas, y se controla mediante técnicas de cromatografía de exclusión
molecular.
El presente trabajo consistió en desarrollar una técnica analítica para la determinación de polirribosil-ribitol-fosfato en su forma
libre, y conjugado a toxoide tetánico, presentes en vacunas anti Haemophilus influenzae tipo b, utilizando cromatografía de exclusión
molecular acoplada a detectores por índice de refracción y por luz ultravioleta a longitudes de onda de 215 y 280 nm. El desarrollo
se planteó sobre antecedentes bibliográficos que describen una metodología similar como control de la instancia de conjugación
en el proceso productivo del ingrediente farmacéutico activo de vacunas anti Haemophilus influenzae tipo b. En el procedimiento se
utilizaron estándares internacionales de los analitos libres y estándares de pesos moleculares, y se evaluó la capacidad del sistema
para discriminar los componentes de la vacuna y detectar diferencias que podrían indicar un compromiso en la calidad de la misma.
Haemophilus influenzae type b is an opportunistic pathogen responsible for invasive and severe infections such as bacteremia
and acute bacterial meningitis in susceptible populations, mainly children under 5 years of age. Its capsular antigen, polyribosylribitol-phosphate, is a specific polysaccharide of serotype b and has been used to produce vaccines, initially in isolation, with
little success due to poor immune stimulation in the target population, and providing little sustained protection over time. Thus,
arose the conjugated vaccines currently used, where the capsular polysaccharide binds to a carrier protein to generate a thymusdependent immune response with immunological memory and suitable for use in children from 2 months of age. Polyribosyl-ribitolphosphate is characterized by being a polymeric sequence of the phosphated sugar of variable length, forming a mixture with
Emilia Ojeda Zachara*, Gisela Severino*, Ana Carolina Abba*, Patricia Aprea.
Departamento del Laboratorio Nacional para el Estudio y Control de Biológicos, Dirección de Evaluación y Control
de Biológicos y Radiofármacos, Instituto Nacional de Medicamentos. Administración Nacional de Medicamentos,
Alimentos y Tecnología Médica, Buenos Aires. Argentina.