Pseudomonas aeruginosa ha emergido como uno de los principales patógenos hospitalarios causantes de infecciones graves y productores de β -lactamasas de espectro extendido (BLEE) inusuales, como PER- 1, OXA y carbapenemasas. Objetivo. Caracterizar los aislamientos de P. aeruginosa resistentes a -β -lactámicos de amplio espectro por investigación de los genotipos por rep- PCR y su diseminación en este hospital. Métodos. Se obtuvieron 26 aislamientos clínicos de P. aeruginosaresistentes a β -lact´micos de amplio espectro del Hospital San Jerónimo de enero a agosto del 2002. La resistencia a los β -lact´micos de amplio espectro se estableció con el sistema MicroScan® ESBL plusTM. Se utilizó la técnica de rep- PCR para la tipificación molecular de los microorganismos. Resultados. Los aislamientos mostraron resistencia a la fluoroquinolona ciprofloxacina (15/26, 57,6%) y aminoglucósidos, como gentamicina (14/ 26, 53,8%) y amikacina (9/26, 34,6%). También se observó resistencia a meropenem e imipenem (3/ 26, 11,5%). La tipificación molecular por rep-PCR mostró dos clones A y B de 15 y 3 aislamientos, respectivamente y 8 aislamientos no relacionados. El clon A con 15 aislamientos incluía dos subclones idénticos de 8 y 2 aislamientos, y 5 aislamientos estrechamente relacionadas. El clon B incluyó 3 aislamientos estrechamente relacionados con similaridad mayor del 90% Conclusiones. La relación de los fenotipos de resistencia expresados por estos aislamientos, posiblemente, indique la existencia de plásmidos de resistencia causantes de la infección hospitalaria en este hospital y responsables de codificar la resistencia a β-lact´micos de amplio espectro. Asimismo, el análisis molecular por rep-PCR mostró la diseminación de dos clones de P. aeruginosa en el hospital, de los cuales el clon A presentó aislamientos idénticos diseminados en diferentes servicios de la institución, lo que sugiere una transmisión horizontal.