Utilização de ensaios de PCR em tempo real in house na rotina diagnóstica de meningites bacterianas nos Laboratórios de Saúde Pública do país
Use of in-house real-time PCR assays in routine diagnosis of bacterial meningitis in the country’s Public Health Laboratories
BEPA, Bol. epidemiol. paul. (Impr.); 21 (221), 2024
Ano de publicação: 2024
Este trabalho descreve a experiência do Instituto Adolfo Lutz (IAL) na implantação de ensaios de PCR em tempo real (qPCR) in house, aplicados ao diagnóstico de meningites bacterianas (MB) causadas por Neisseria meningitidis (Nm), Streptococcus pneumoniae (Spn) e Haemophilus influenzae (Hi). São apresentadas estratégias para o aprimoramento dos ensaios de qPCR originalmente propostos, incluindo avaliação de diferentes alvos genéticos e incorporação de controle interno da qualidade pela detecção de gene constitutivo humano (RNase P) nas amostras biológicas processadas na rotina. Descreve também os ensaios de qPCR estabelecidos para identificação dos principais genogrupos de Nm e dos seis genotipos de Hi, que geram informações capazes de contribuir para a avaliação da efetividade das vacinas conjugadas presentes no Programa Nacional de Imunização. O trabalho mostra, ainda, o repasse dos ensaios de qPCR para outros laboratórios de saúde pública do país e a contribuição do uso desses ensaios na vigilância laboratorial das MB. Ademais, apresenta outras contribuições do IAL para o aprimoramento do diagnóstico laboratorial da meningite, como a produção de controles genéticos distribuídos para os laboratórios públicos do país, a avaliação do uso de cartões de papel de filtro no transporte de amostras clínicas entre laboratório local e de referência e a avaliação de kits comerciais empregados no diagnóstico das MB. Por último, menciona as considerações finais do trabalho, com reflexões acerca do futuro do uso dos ensaios de qPCR no diagnóstico laboratorial das MB.
This paper describes the experience of the Instituto Adolfo Lutz (IAL) in implementing in-house real-time PCR (qPCR) assays used in the diagnosis of bacterial meningitis (BM) caused by Neisseria meningitidis (Nm), Streptococcus pneumoniae (Spn) and Haemophilus influenzae(Hi). Strategies for improving the originally proposed qPCR assays are presented, including the evaluation of different genetic targets and incorporation of internal quality control by human constitutive gene detection (RNase P) in biological samples processed in routine. It describes the qPCR assays established to identify the main Nm genogroups and the six Hi genotypes, which generate information that can contribute to evaluating the effectiveness of conjugate vaccines present in the National Immunization Program. It shows the transfer of qPCR assays to other Public Health Laboratories in the country and the contribution of using these assays in BM laboratory surveillance. Furthermore, it presents other IAL contributions to improve BM laboratory diagnosis, such as the production of genetic controls that are distributed to Brazilian public laboratories, the evaluation of the use of filter paper cards for transporting clinical samples between local and reference laboratories, and the evaluation of commercial kits used in the BM diagnosis. Finally, it mentions the final considerations of the work, with reflections on the future of using qPCR assays in the laboratory diagnosis of BM.