A paracoccidioidomicose (PCM) é causada por fungos do gênero Paracoccidioides: Paracoccidioides brasiliensis e P. lutzii. A micose apresenta alta endemicidade na América do Sul e aproximadamente 80% dos casos descritos são registrados no Brasil. P. lutzii, tem sido apontado como agente causal da PCM, especialmente nas regiões Centro-Oeste e Norte, entretanto, alguns grupos têm relatado, a ausência de reatividade sorológica dos pacientes frente ao antígeno de referência de P. brasiliensis, conhecida por apresentar em sua composição a molécula de 43 kDa. Este estudo tem como principal objetivo estabelecer um protocolo para a produção de antígenos de P. lutzii que possam ser utilizados como referência em ensaios sorológicos para esta espécie. As preparações antigênicas foram obtidas a partir de três isolados (01, 66 e 8334), cultivados à 37ºC, empregando-se dois meios de cultura distintos, ágar Fava-Netto modificado e ágar Sabouraud-dextrose, segundo os protocolos descritos por Freitas (2005) e Assis et al. (1989), sendo que um terceiro protocolo foi proposto durante o desenvolvimento deste projeto. Os antígenos foram obtidos após cinco (5), 10 e 20 dias de cultivo e foram avaliados in natura, 10 e 20 vezes concentrados por liofilização. Considerando-se os diferentes pontos avaliados, este projeto gerou a produção de 90 preparações antigênicas. O screening das preparações antigênicas com potencial aplicabilidade no imunodiagnóstico da PCM causada por P. lutzii, permitiu a seleção de seis antígenos: quatro produzidos a partir do protocolo descrito por Freitas (2005), sendo três obtidos em ágar Fava-Netto modificado e um em ágar Sabouraud-dextrose e dois obtidos segundo o protocolo proposto durante o desenvolvimento deste projeto, ambos obtidos em Fava-Netto modificado. Verificou-se que todas as seis preparações antigênicas, apresentaram reatividade cruzada frente a soros de pacientes com PCM confirmada e residentes em região não endêmica para P. lutzii, bem como para soros de pacientes com PCM confirmada ou com suspeita clínica da micose, residentes em regiões endêmicas para P. lutzii. Observou-se que o uso do immunoblotting melhorou a sensibilidade do diagnóstico da PCM, porém, reafirmou a ocorrência de reatividade cruzada entre as espécies de Paracoccidioides sp, já que diversas amostras de soro reconheceram tanto os marcadores sorológicos da infecção por P. brasiliensis (gp43 e gp70), assim como diversas frações de P. lutzii, com destaque a fração de 60 kDa. A comparação do perfil eletroforético, por SDS-PAGE, confirmou o compartilhamento de componentes antigênicos entre ambas as espécies de Paracoccidioides, justificando assim, a ocorrência de reatividade cruzada. Diante destes resultados, conclui-se que não é possível discriminar, sorologicamente PCM causada por P. brasiliensis daquela causada por P. lutzii. (AU)