Optimización de cultivos primarios de células de carcinoma renal de células claras como modelo "in vitro" para estudios metabólicos y determinantes de progresión neoplásica
Optimization of primary cultures of clear cell renal carcinoma cells as an "in vitro" model for metabolic studies and determinants of neoplastic progression
Rev. Fac. Med. Univ. Nac. Nordeste; 36 (1), 2016
Publication year: 2016
El objetivo del presente estudio fue optimizar la implementación de cultivos primarios a partir de muestras de
carcinoma renal de células claras (CRCC) para comprobar la conservación del fenotipo lipogénico contra cortes
fijados del mismo origen.
Se utilizaron muestras de pacientes con CRCC, evaluándose diversas metodologías y condiciones experimentales
de digestión de muestras, adherencia y despegue celular, fenotipo lipogénico, potencial de clonación,
proliferación y capacidad de migración. El mayor rendimiento y viabilidad celular se verificó mediante digestión
con colagenasa. La adherencia inicial se logró a las 24 hs de incubación, utilizando placas plásticas de cultivo,
recubiertas con colágeno comercial y gelatina 0,2% en la mayoría de las muestras analizadas (60% de los casos). Se
obtuvieron monocapas, con potencial de migración, en un 40% de los casos, tras 5 ± 1 días de incubación. El
promedio de subcultivos fue de 3 ± 1. Este estudio permitió estandarizar cultivos primarios de CRCC
comprobándose la conservación de la fenotipia lipogénica, logrando de dicha manera una herramienta importante
y útil para el estudio de la biología tumoral y el ensayo de nuevas terapéuticas
The aim of this study was to optimize the implementation of primary cultures from samples of renal clear cell
carcinoma (CRCC) to check the conservation of the lipogenic phenotype.
CRCC Patient samples were used, in order to evaluate different methodologies and the experimental conditions of
sample digestion, cell adhesion and lipogenic phenotype, proliferation and migration ability. The highest yield in
cell number and viability was assessed using collagenase digestion. The initial adhesion was achieved after 24
hours of incubation in plastic plates recoverd with commercial collagen or 0.2% gelatin (60% of cases).
Monolayers, with migration potential, were obtained in 40% of all cases, after 5 ± 1 days of incubation. The
subcultures average was 3 ± 1. This study allowed us to standardize primary cultures of CRCC and check the
conservation of the lipogenic phenotyping, achieving in this way an important and useful tool to study the tumor
biology.
O objetivo deste trabalho foi otimizar a implementação de culturas primárias de amostras de carcinoma de células
claras renal (CRCC) para verificar conservação fenótipo lipogenic contra os cortes previstos a mesma origem.
As amostras dos pacientes foram utilizados CRCC, avaliando diferentes metodologias e as condições experimentais
da digestão de amostras, adesão celular e fenótipo clonagem potencial take-lipogenic, proliferação e capacidade
de migração. O maior rendimento e a viabilidade celular foi avaliada por digestão com colagenase. A adesão inicial
foi obtida após 24 horas de incubação com colagénio e gelatina comercial 0,2% em 60% dos casos. As
monocamadas foram obtidos em 40% após 5 ± 1 dias de incubação com o potencial de migração. As subculturas
média foi de 3 ± 1. Este estudo nos permitiu padronizar culturas primárias de CRCC são verificados quanto à
conservação da fenotipagem lipogenic, conseguindo desta forma um importante e útil para o estudo da biologia
do tumor e teste de nova ferramenta terapêutica