La determinación de Subpoblaciones Linfocitarias Humanas (SLH) por Citometría de Flujo, Linfocitos CD3+ (LT), LTCD4+, LTCD8+ y la relación LTCD4+/LTCD8+, permiten monitorear pacientes infectados con virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), los cuales son comparados con Valores de Referencia (VR). A su vez los VR informados por la bibliografía son variables debido a la falta de validación analítica y partición estadística de los datos de VR, entre otros. En este trabajo, utilizando un ensayo validado (ISO15189), se establecieron VR para SLH con criterios estadísticos de partición en individuos con serología negativa para VIH (397 mujeres (F) y 279 varones (M), edad: 17-83 años). Las SLH fueron medidas en un Citómetro de Flujo (Coulter Epics XL-MCL). Los datos fueron procesados empleando como criterio estadístico de partición el algoritmo de Martin Gellerstedt (AMG). Del análisis estadístico y del AMG se determinó la partición de los datos en 6 subpoblaciones definidas por edad (intervalo de años) y género (F y M): grupos I y IV: 17-35 (F y M); grupos II y V: 36-50 (F y M); y grupos III y VI: >50 años (F y M). Para los 6 grupos se definieron VR de linfocitos totales, LT, LTCD4+, LTCD8+ y LTCD4+/LTCD8+. Para cada límite inferior y superior de VR se estableció el intervalo de confianza al 90%. En conclusión, este estudio permitió establecer VR para SLH en un ensayo validado empleando un criterio estadístico de partición, lo cual permitiría incrementar la confiabilidad de los resultados y uniformar a nivel internacional los VR en SLH en diferentes poblaciones.