Este trabalho teve como objetivo determinar a prevalência de Escherichia coli produtoras de Shigatoxinas (STEC) e E. coli dos sorogrupos O157, O111 e O113 em rebanhos leiteiros do Município de Jaboticabal, SP, Brasil. A presença de sequências gênicas stx1, stx2e eae foi detectada pela reação em cadeia da polimerase (PCR) em amostras de fezes. Todas as amostras stx e eae positivas foram submetidas a uma nova reação de PCR para detecção das sequências rfb O157, O111 e O113. Observou-se uma alta prevalência (72,16%) de sequências stx nas fezes dos bovinos, sendo que o perfil genotípico encontrado com maior frequência foi o stx1 associado à stx2. Os coeficientes de prevalência das sequências rfb O157, O111 e O113 foram, respectivamente, 14,77%, 0,2% e 30,83%. Animais de todos os rebanhos (100%) apresentaram em suas fezes STEC e E. coli O113 e os sorogrupos O157 e O111 foram observados em 60,0% e 10,0% dos rebanhos, respectivamente. Concluiu-se que a alta prevalência de STEC detectada em rebanho leiteiro evidenciada nas fezes de bovinos desempenham um papel importante na contaminação ambiental e podem oferecer risco de agravo à saúde pública.