Investig. andin. (En lÃnea); 21 (39), 2019
Publication year: 2019
Introducción:
Infección persistente con el virus de papiloma humano de alto riesgo (VPH-AR) causa cáncer de cuello uterino (CCU). Existen ensayos moleculares para la detección y la genotipificación del gen L1 de VPH, sin embargo, L1 puede perderse durante la integración viral. La expresión e integración del oncogén E7 es fundamental para el desarrollo de CCU. Objetivo:
Estandarizar una PCR multiplex (mPCR) del oncogén E7 (E7-mPCR) para genotipificación de los VPH-AR de mayor frecuencia en CCU (VPH-16, -18, -31, -33, -45 y -52). Métodos:
Se obtuvieron cepillados cervicales de voluntarias y se analizaron amplificando por PCR el gen L1 con subsecuente hibridación reversa. Posteriormente, se escogieron 59 muestras positivas para VPH-AR y se analizaron por E7-mPCR. Resultados:
Se evidenció una elevada concordancia entre los resultados del ensayo E7-mPCR y los de la PCR de L1 (concordancia observada de 95,1 %, Kappa de Cohen = 0,88), encontrándose mayor número de infecciones por VPHAR en el 15,8 % con E7-mPCR. Conclusión:
E7-mPCR es una herramienta diagnóstica con alta concordancia y económica que puede adaptarse a una plataforma de mayor complejidad para procesar y detectar mayor cantidad de muestras y genotipos de VPH-AR.
Introduction:
Persistent infection with high-risk human papillomavirus (HR-HPV) causes cervical cancer (CCU). Molecular assays exist for detection and genotyping of the HPV L1 gene, however, L1 can be lost during viral integration. The expression and integration of the E7 oncogene is critical for the development of CCU. Objective:
To standardize a multiplex PCR (mPCR) of the E7 oncogene (E7-mPCR) for genotyping the most frequent HR-HPVs in CCU (HPV-16, -18, -31, -33, -45 and -52). Methods:
Cervical brushings were obtained from volunteers and analyzed by PCR amplification of the L1 gene with subsequent reverse hybridization. Subsequently, 59 HR-HPV-positive samples were selected and analyzed by E7-mPCR. Results:
There was a high concordance between E7-mPCR and L1 PCR results (observed concordance 95.1 %, Cohen's Kappa = 0.88), with a higher number of HR-HPV infections found in 15.8 % with E7-mPCR. Conclusion:
E7-mPCR is a highly concordant and cost-effective diagnostic tool that can be adapted to a more complex platform to process and detect a larger number of HR-HPV samples and genotypes.
Introdução:
A infeção persistente pelo papilomavÃrus humano de alto risco (HR-HPV) causa cancro do colo do útero (CCU). Existem ensaios moleculares para a deteção e genotipagem do gene L1 do HPV, no entanto, o L1 pode perder-se durante a integração viral. A expressão e integração do oncogene E7 é fundamental para o desenvolvimento do CCU. Objetivo:
Padronizar uma PCR multiplex (mPCR) do oncogene E7 (E7-mPCR) para genotipar os HR-HPVs mais frequentes no CCU (HPV-16, -18, -31, -33, -45 e -52). Métodos:
Foram obtidas escovagens cervicais de voluntárias e analisadas por amplificação por PCR do gene L1 com subsequente hibridação inversa. Subsequentemente, foram seleccionadas 59 amostras HR-HPV-positivas e analisadas por E7-mPCR. Resultados:
Verificou-se uma elevada concordância entre os resultados da E7-mPCR e da L1 PCR (concordância observada de 95,1 %, Cohen's Kappa = 0,88), com um número mais elevado de infecções por HR-HPV detectadas em 15,8 % com a E7-mPCR. Conclusão:
A E7-mPCR é uma ferramenta de diagnóstico altamente concordante e económica que pode ser adaptada a uma plataforma mais complexa para processar e detetar um maior número de amostras e genótipos de HR-HPV.