Objetivou-se investigar ex vivo o diâmetro anatômico e conicidade do canal mesiopalatino de primeiros molares superiores. Para tanto, trinta e três primeiros molares superiores humanos foram acessados, explorados para confirmação da existência do canal mesiopalatino, identificados, suas raízes mesiovestibulares seccionadas transversalmente em três níveis e, então, os fragmentos foram fotografados com microscópio digital, que permitiu a realização das determinações dos diâmetros anatômicos deste canal em cada amostra. Os resultados foram calculados em função dos valores médios e de desvio padrão dos diâmetros em cada nível, obtendo-se respectivamente 0,20 mm e ±0,09 mm (nível cervical), 0,20 mm e ±0,08 mm (nível médio) e 0,17 mm e ±0,06 mm (nível apical). Nas condições deste estudo, de acordo com caráter atrésico e baixa conicidade do conduto mesiopalatino, sugere-se a necessidade de uso de instrumentos de diâmetro de ponta mínimo de 0,25 mm e conicidade 0,03 para o seu preparo.