Os testes de produçäo de acetoína, determinaçäo da atividade da enzima ß-galactosidase e utilizaçäo anaeróbica do manitol em conjunto com a susceptibilidade à acriflavina foram avaliados para diferenciaçäo de amostras de Staphylococcus coagulase-positivas (SCP) isoladas de mastite bovina. As amostras foram classificadas no gênero Staphylococcus por meio da sensibilidade a furazolidona, resistência à bacitracina, produçäo de ácido em aerobiose a partir de glicerol na presença de 0,4µg ml(-1) de eritromicina e catalase, e foram positivas no teste de coagulase do plasma de coelho em tubos. A susceptibilidade à acriflavina foi testada em placas de ágar P com 7,0µg ml(-1) de acriflavina. Como controle dos testes, foram incluídas cinco amostras coagulase-negativas de S. hyicus isoladas de leite bovino e identificadas pelo sistema API Staph e a amostra de S. aureus ATCC 29213. Trinta e oito das 49 amostras de SCP foram identificadas como S. aureus e 11 como S. hyicus, näo sendo identificada nenhuma como S. intermedius. O sistema API Staph foi empregado para confirmar a identificaçäo das amostras coagulase-positivas de S. hyicus, sete amostras de S. aureus negativas no teste de produçäo de acetoína e quatro negativas na fermentaçäo anaeróbica do manitol. Todas as amostras de S. aureus foram resistentes a acriflavina, enquanto as de S. hyicus foram sensíveis. Concluiu-se que a sensibilidade a acriflavina pode ser empregada juntamente com os testes de coagulase e produçäo de acetoína na diferenciaçäo de SCP isolados de mastite bovina.