Introdução - As mãos dos Profissionais da Área da Saúde (PAS), quando não higienizadas adequadamente, podem carrear grande quantidade de microrganismos entre pacientes, paraequipamentos médico-cirúrgicos ou ainda para medicamentos e alimentos, proporcionando condições favoráveis à infecção hospitalar. Recentemente, há um interesse dos PAS a respeito deste tema, tal fato é observado através da diversidade de publicações e pesquisas: revisão do assunto, barreiras que influenciam na freqüência da higiene das mãos (HM), eficácia e impacto dos produtos existentes, ênfase na utilização do álcool para HM, métodos para avaliar a adesão a HM e relatos de métodos de educação continuada utilizadas para incentivar e educar o PAS a higienizar suas mãos. O objetivo é avaliar o conhecimento, e a adesão da HM dos PAS, dentro de um hospital universitário, terciário que atende a pacientes do Sistema Único de Saúde. Material e Métodos - Trata-se de um estudo unicêntrico, quantitativo, de natureza exploratória, onde se elaborou um questionário com doze questões objetivas. Incluiu-se neste trabalho todos os profissionais da área de Enfermagem dos três turnos. Resultados - Os resultados mostraram que os PAS sabem sobre a técnica correta da HM, no entanto possuem dúvidas em relação aos produtos, as indicações e os procedimentos. Quanto à adesão apenas 39% dos entrevistados apontaram seu setor como efetivo na HM. Conclusão - Concluí-se que os PAS da instituição possuem conhecimento a respeito das normas e técnicas sobre HM preconizadas. Porém treinamento e programa de incentivos periódicos são necessários para reforçar a adesão às medidas propostas, visando a melhoria e qualidade na assistência de Enfermagem.