O uso de método funcional para dosagem de antitrombina III (ATIII) é fundamental para o diagnóstico de deficiência deste inibidor da coagulaçao. OBJETIVO. Padronizar metodologia para dosagem da ATIII no plasma, utilizando-se microplacas, em diferentes situaçoes clínicas. MÉTODOS. A dosagem de ATIII foi feita utilizando-se o substrato cromogênico Tos-Gly-Pro-Arg-NAN, específico para trombina, e sintetizado no Departamento de Biofísica da Escola Paulista de Medicina. RESULTADOS. Dos 21 pacientes com trombose venosa (TV-P), 20 apresentaram valores superiores a 70 por cento (ll3 ñ 22 por cento), dos quais uma paciente de 22 anos apresentava deficiência congênita, com ATIII de 56 por cento e história de TVP recorrente, além de história familiar de TVP. O nível de ATIII em seis pacientes portadores de doença de von Willebrand foi normal (lO9 ñ 28 por cento), como esperado. Em 20 pacientes com insuficiência hepática foi observada reduçao importante do nível de ATIII (42 ñ 19 por cento), pois este inibidor é produzido no hepatócito, sendo bom parâmetro para avaliar a funçao hepática. Os três pacientes portadores de sepse com CIVD apresentaram níveis reduzidos de ATIII (45 + 5 por cento), que é consumida durante processo de ativaçao intravascular da coagulaçao. Os níveis de ATIII mostraram correlaçao significante com o TP e os níveis de fator V, ambos bons parâmetros para avaliaçao da funçao hepática e para monitorizaçao da CIVD. Houve correlaçao significante entre as dosagens realizadas com o substrato Tos-Gly-Pro-Arg-NAN, sintetizado na EPM, e o substrato S-2238 do laboratório Kabi. CONCLUSOES. A medida da ATIII usando substrato cromogênico Gly-Pro-Arg-NAN é de fácil execuçao e é sensível para o diagnóstico da deficiência deste inibidor em pacientes com insuficiência heopática, coagulaçao intravascular disseminada e trombofilia.