Determinaçäo de colesterol em ovos: comparaçäo entre um método enzimático e um método por cromatografia líquida de alta eficiência
The determination of cholesteral in eggs: a comparison of an enzymatic method with that of high performance liquid chromatography
Rev. Inst. Adolfo Lutz; 62 (1), 2003
Publication year: 2003
Os métodos enzimáticos apesar de serem baratos e simples são pouco utilizados na análise de colesterol em alimentos, uma vez que a enzima reage com qualquer esterol presente na amostra. Considerando que ovos possuem apenas colesterol, o objetivo deste trabalho foi otimizar um método por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Em ambos os métodos foi realizado saponificação direta das amostras e extração da matéria insaponificável com hexano. No método enzimático foi utilizado um kit (LABORLAB SA) e a absorbância foi determinada a 499 nm, 90 minutos após a reação. Na CLAE utilizou-se coluna C18, 100x4,6 mm x 4um (Chromolith, Merck), fase móvel acetonitrila:isopropanol (85:15) e fluxo de 2mL/min. Os métodos foram validados através de testes de recuperação, material de referência certificado de ovo em pó (SRM 1846,NIST) e receptibilidade. Os valores médios de colesterol nos ovos foram 1363 +- 47 e 1364 +- 40mg/100g de gema para o método enzimático e por CLAE, respectivamente, não havendo diferenças significativas (p>0,01) entre os resultados obtidos pelos dois métodos. Ambos os métodos podem ser utilizados com confiabilidade para determinação de colesterol em gema de ovos, sendo que o método enzimático possui vantagem de ser bem menos oneroso que o por CLAE. (AU)
Enzymatic methods are simple and of low-cost, but are nevertheless little used in thedetermination of cholesterol in foods as the enzyme reacts with any sterol, present in the sample. As eggsonly have cholesterol, the objective of this study was to optimize an enzymatic method for the determinationof cholesterol in eggs and compare it to a high performance liquid chromatography (HPLC) method. Forboth methods, the samples were saponified directly and the unsaponifiable matter extracted with hexane.For the enzymatic method, a test kit (LABORLAB S.A) was used and the absorbance read at 499 nm, 90minutes after the reaction. For HPLC, a C18, 100 x 4.6 mm x 4 μm (Chromolith, Merck) column was used,the solvent being acetonitrile:2-propanol (85:15 v/v) with a flow rate of 2 mL/min. The methods werevalidated according to recovery test, the use of egg standard reference material (SRM 1846, NIST), andrepeatability. The mean result for the enzymatic method was 1363 ± 47 and for HPLC 1364 ± 40 mg/100g of yolk. There were no significant differences (p>0.01) found between the results of the two methods.Both methods are reliable for use in the determination of cholesterol in yolk, the enzymatic method showingthe additional advantage of being cheaper than HPLC. (AU)