A lavadora termodesinfectadora é uma tecnologia que trouxe grandes vantagens, como protocolos, padronização dos procedimentos, documentação do processo, redução do risco ocupacional de ordem biológica e ambiental. Objetiva-se avaliar o desempenho da limpeza e desinfecção realizadas por máquinas lavadoras desinfectadoras automáticas em programas com diferentes tempos e temperaturas preconizados por distintos órgãos oficiais. Esse desempenho foi validado conforme as recomendações das Normas ISO 15883-1/1999 e HTM2030 para cálculo teórico e com termopares da Letalidade Mínima e Nível de Segurança de Desinfecção. Para avaliação do resultado da limpeza, foram utilizados Soil Test, teste Biotrace Pro-tect e o Teste Kit Proteína. O procedimento de contagem de UFC de microrganismos viáveis foi realizado antes e após termodesinfecção. Os resultados estão em conformidade com a Norma ISO e HTM. Comprovou-se desempenho excelente dessas Máquinas: desinfecção de alto nível. Esse protocolo permitiu a avaliação da prática baseada na evidência, fortalecendo o papel da equipe multiprofissional do Centro de Material na prevenção das infecções.