Objetivo – Analisar o nível de contaminação do setor de radiodiagnóstico de uma instituição de saúde de uma cidade do interior do estado de São Paulo, além de averiguar o conhecimento dos funcionários do setor em relação à biossegurança. Métodos – Foram coletadas amostras das superfícies dos equipamentos e das mãos dos funcionários do referido setor para ser analisado o crescimento de microrganismos em meios de cultura. Além disso, foi aplicado um questionário para avaliar o grau de conhecimento de biossegurança dos funcionários desse setor. Resultados – Os resultados obtidos mostraram que esses profissionais não se preocupam muito com a própria segurança e em evitar a transmissão de microrganismos de um paciente para outro, tomando precaução somente com pacientes diagnosticados com infecções. A higienização das mãos, quando realizada, é feita com álcool 70% e poucas vezes são lavadas com sabão. Devido a este e a outros fatos foram encontradas bactérias da microbiota normal da pele nas superfícies dos equipamentos de radiodiagnóstico, além de enterobactérias. Conclusão – Desta maneira, as Comissões de Controle de Infecção Hospitalar (CCIH) das institui- ções de saúde deveriam desenvolver atividades educativas também com o setor de radiodiagnóstico, assim com os outros profissionais da equipe multidisciplinar que atuam dentro dessas instituições, a fim de buscar uma melhor qualidade na prestação do serviço e maior segurança aos próprios profissionais e pacientes.