O objetivo deste trabalho foi extrair o DNA genômico de tecidos sólidos de tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus), pacu (Piaractus mesopotamicus), piau (Leporinus sp.) e curimba (Prochilodus lineatus), utilizando os métodos Proteinase K (PK) e Brometo de Cetiltrimetilamônio (CTAB). O DNA extraído das amostras de fígado, rim, nadadeira caudal, coração, músculo e brânquias foi quantificado em espectrofotômetro para determinação da concentração e da pureza por meio da razão A260nm/A280nm. Os dados foram estatisticamente analisados e não se observou efeito significativo para a interação entre espécies e tecidos em relação à pureza e concentração do DNA obtido a partir do CTAB, porém para PK houve interação em relação à concentração. Utilizando o método CTAB verificou-se que a concentração média do dna no rim de curimba foi significativamente (p<0,05) inferior (106,98 ug/mL) à observada em pacu (1727,90 ug/mL), porém não diferiram das encontradas em piau (497,20 ug/mL) e tilápia (234,50 ug/mL). Para o método PK, a concentração média de DNA utilizando o músculo de tilápia do Nilo apresentou o menor valor (117,35 ug/mL) em relação aos demais tecidos e espécies analisadas (p<0,05). A razão A260nm/A280nm variou de 1,7 a 2,0 e 1,6 a 2,1 para os métodos PK e CTAB, respectivamente. Conclui-se que a pureza do DNA foi alcançada nos diferentes tecidos estudados, demonstrando que o método PK pode ser utilizado para essas quatro espécies de peixes.