Real-time quantitative polymerase chain reaction (QPCR) for the identification and quantification of streptococcus mutans in saliva and dental biofilm in children

Moncada-Cortes, Gustavo Adolfo; Duperat, Lorena Del Carmen; Palma, Patricia; Corsini, Gino; Neira, Miguel; Reyes, Evelyn; Oliveira-Junior, Osmir Batista; Faleiros, Simone; Gordan, Valeria; Yévenes, Ismael

ABSTRACT Introduction:

the objective of this study was to use real-time qPCR to identify and quantify the Streptococcus mutans species in samples of saliva and dental biofilm.

Methods:

27 children were randomly chosen with the following criteria: 8 years of age, low socio-economic levels, residing in the northern metropolitan area of Santiago de Chile; they were asked to attend an appointment while fasting with no teeth brushing for at least 12 hours, in order to collect non-stimulated saliva and a pool of supragingival dental biofilm of all the mesio-vestibular sides of anterior and posterior teeth. The amount of S. mutans in the samples was quantified by qPCR using primers that amplify a fragment of the gtfB gene of S. mutans.

Results:

the amplification showed 98% efficiency with a fluorescence of 3.36 cycles. The melting curve presented a single maximum at the same temperature for all samples.

Conclusion:

the methodology allows the specific identification and quantification of gene gtfB of S. mutans in saliva and dental biofilm in a quick and reliable manner, contributing to the identification of individual cariogenic risk.

RESUMEN.

Introducción:

el objetivo del presente estudio consistió en implementar la técnica de qPCR en tiempo real para identificar y cuantificar la especie Streptococcus mutans en muestras de saliva y biopelícula dentaria.

Métodos:

se seleccionaron al azar 27 niños de 8 años de edad, de nivel socio-económico bajo del área norte de la región metropolitana de Santiago de Chile, que se citaron en ayunas y sin cepillado durante al menos 12 horas, para colectar saliva no estimulada y un pool de biopelícula dentaria supragingival de todas las caras mesio-vestibulares de dientes anteriores y posteriores. Se cuantificó la cantidad de S. mutans en las muestras mediante qPCR empleando partidores que amplifican un fragmento del gen gtfB de S. mutans.

Resultados:

la amplificación presentó 98% de eficiencia con delta de fluorescencia de 3,36 ciclos. La curva de fusión (melting) presentó un solo máximo a una misma temperatura para todas las muestras.

Conclusión:

la metodología permite la identificación y cuantificación específica del gen gtfB de S. mutans en muestras de saliva y biopelícula dentaria, de forma rápida y exacta, aportando a la determinación del riesgo cariogénico individual.