Se analizó un total de 274 muestras de orina de pacientes ambulatorios que acudieron a los centros de salud 1, 2 y 3 de la ciudad de Cuenca durante el periodo comprendido entre mayo y junio del año 2013, con el fin de obtener al menos 100 muestras de orina con presencia de Escherichia coli. Se recuperaron 103 cepas de Escherichia coli y se continuó el estudio con la identificación de la producción de Betalactamasas de Espectro Extendido (BLEE), mediante la técnica descrita en el manual CLSI. Se realizaron las pruebas presuntivas y confirmatorias, aplicando el método convencional de difusión en agar, en placas de agar Mueller-Hinton, con un inóculo Mac Farland 0,5 y ensayando los discos de antimicrobiano. Para la prueba presuntiva se emplearon los discos de aztreonam, cefotaxime, ceftazidime y ceftriaxona; para la prueba confirmatoria se utilizaron los discos de ceftazidime y cefotaxime en combinación con ácido clavulánico; la producción de BLEE se determinó mediante la diferencia del diámetro de los halos según se indica en la técnica. Los resultados mostraron que de 103 cepas de E. coli se recuperaron siete (6,8 %) cepas productoras de BLEE y si se considera que la población con la que se trabajó fue de pacientes ambulatorios resulta muy importante la realización de los métodos de identificación de BLEE como apoyo para la correcta terapia antimicrobiana, previniendo de esta manera la diseminación de cepas de E. coli productoras de BLEE.