Dentes bovinos têm sido utilizados como substitutos aos humanos em pesquisas odontológicas. Entretanto, faltam dados que suportem o uso da dentina radicular bovina, sobretudo, que analisem o efeito da idade nas propriedades do substrato. Assim, analisou-se o efeito da idade nos aspectos morfológicos, químicos e físicos das dentinas radiculares humana e bovina, em função dos terços da raiz. Trata-se de um estudo experimental, in vitro, aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa (COEP-UFMG 1.803.933) e pela Comissão de Ética no Uso de Animais (CEUAUFMG 372/2016). A amostra foi composta por dentes unirradiculares, cujas dentinas radiculares foram categorizadas em: humana jovem (HJ, 20-30 anos); humana madura (HM, acima de 60 anos); bovina jovem (BJ, 24-36 meses); e bovina adulta (BA, acima de 48 meses). Os dentes foram seccionados abaixo da junção amelocementária e ao longo eixo da raiz, para a obtenção de hemisecções. Uma hemisecção foi escolhida e cortes foram feitos para a obtenção dos espécimes, conforme cada método de análise. Para as análises dos aspectos morfológicos — número, diâmetro e área dos túbulos dentinários — os espécimes foram analisados em Microscópio Eletrônico de Varredura. A composição química foi analisada por Espectroscopia de Raios X por Dispersão em Energia, Espectroscopia por Comprimento de Onda Dispersivo e Espectroscopia Raman por Transformada de Fourier. Na análise das propriedades mecânicas, os espécimes foram submetidos aos testes de nanoindentação, resistência à flexão em três pontos e compressão. Para a análise da resistência ao cisalhamento por extrusão, as raízes receberam tratamento endodôntico e foram fixados pinos de fibra de vidro com cimentos resinosos (dual convencional e autoadesivo). As raízes foram seccionadas nos terços radiculares e os espécimes testados em máquina universal de ensaios. Adicionalmente, avaliou-se o grau de conversão dos cimentos resinosos. Os dados foram analisados em software estatístico, nível de significância de 5%. A HM apresentou os menores valores para número, diâmetro e área de túbulos dentinários (p<0,05). A HM apresentou maiores valores de cálcio, razão Ca/P e concentração mineral relativa, com diminuição na organização e qualidade do colágeno (p<0,05). A HM apresentou os maiores valores de nanodureza, módulo de elasticidade e resistência à compressão, mas os menores valores de resistência à flexão e módulo de elasticidade à flexão (p<0,05). A HM apresentou os menores valores de resistência de união, com diferenças entre os terços radiculares (p<0,05). O grau de conversão dos cimentos apresentou uma diminuição ao longo dos terços radiculares (p<0,05). Concluiu-se que a idade possui um efeito nos aspectos morfológicos, químicos e físicos da dentina radicular humana, sem efeito na dentina bovina. Assim, quando da necessidade de substituição da dentina radicular humana pela bovina em pesquisas, é necessário considerar o efeito da idade nos desfechos analisados.