Publication year: 2020
Theses and dissertations in Portugués presented to the Fundação Antônio Prudente to obtain the academic title of Doutor. Leader: Chinen, Ludmilla Thomé Domingos
Introdução:
O câncer de mama triplo negativo (CMTN) corresponde de 10 a 20% dos carcinomas invasivos de mama, é altamente agressivo e na maioria das vezes tem apenas a quimioterapia padrão como tratamento. As citocinas inflamatórias são um grupo heterogêneo de proteínas solúveis produzidas por diferentes tipos de células, que medeiam e regulam o sistema imune. A resposta imune celular é regulada por proteínas acessórias denominadas receptores co-estimuladores e co-inibidores, como 4-1BB e TIM-3, respectivamente. A procura por biomarcadores que possam predizer resposta à quimioterapia neoadjuvante (QT neo) ainda é um desafio na medicina. Objetivo:
Avaliar os níveis solúveis de sTIM-3 e s4-1BB, e de citocinas inflamatórias no sangue de mulheres com câncer de mama triplo negativo localmente avançado e associá-los à sobrevida livre de doença e com o tipo de resposta patológica à QT neo. Métodos:
O estudo foi realizado entre os anos de 2015 e 2017 no Hospital de Câncer de Pernambuco (HCP) e Laboratório de Pesquisa Translacional do Instituto de Medicina Integral Prof. Fernando Figueira (IMIP). Foram incluídas 29 mulheres, entre 18 e 60 anos de idade, com diagnóstico de CMTN localmente avançado e submetidas à QT neo, e um grupo de 30 mulheres saudáveis. Coletas de sangue periférico foram realizadas antes e após a QT neo. A dosagem dos níveis solúveis de s4-1BB e sTIM-3 foi realizada por enzyme linked immunonoSorbent assay (ELISA). As dosagens de IL-1β, IL-6, IL-8, TNF-α e IL-10 foram realizadas pela técnica de Cytometric Bead Array por citometria de fluxo. O nível de significância estatística foi de p<0,05. Resultados:
Níveis mais elevados de IL-6 e de IL-10 foram observados no grupo de pacientes com tumor T4 com relação as grupo T2-T3 (p<0.05). Níveis elevados de IL-6, IL-8, IL-10 e TNF-α no grupo CMTN com status linfonodal N2 versus N0 e N1 (p<0,05). Os níveis de IL-1β, IL-6, IL-10 e TNF-α foram elevados no grupo com resposta patológica parcial (RP) quando comparado aos grupos com resposta patológica completa (RC) e controles (p<0,05). Com relação aos níveis de IL-8, os grupos de pacientes RC e RP apresentaram níveis elevados quando comparados aos controles (p<0,05). Não foi observada diferença significativa de IL-8 entre os grupos RC e RP. Não foram observadas diferenças significativas em níveis de s4-1BB E sTIM-3 de acordo com o tumor primário e status linfonodal. Elevados níveis de s4-1BB foram observados no grupo RC comparado aos grupos RP e de controles (p<0,0004 e p<0,0001, respectivamente). Da mesma forma, os níveis de sTIM-3 foram mais elevados nas pacientes com RC e RP em relação aos controles (p<0,0001 e p<0,0003, respectivamente). Para análise da sobrevida livre de doença (SLD) em 24 meses de seguimento, utilizamos como ponto de corte o valor da mediana (< ou ≥ percentil 50) dos níveis solúveis de sTIM-3 e s4-1BB. Não houve diferenças significativas na SLD entre os grupos com níveis de s4-1BB ≥ 122 e < 122 pg/mL. A SLD foi de 93,33% no grupo com níveis de sTIM-3 < 2874 pg/mL e de 60% no grupo com níveis ≥ 2874 pg/mL (p=0,03). Conclusão:
O s4-1BB foi um bom indicador preditivo de resposta à QT neo, enquanto elevação de sTIM-3 mostrou estar associado ao risco de recidiva loco-regional e metástases à distância. Ambos, TIM-3 e 4-1BB, parecem ser potenciais alvos terapêuticos no CMTN localmente avançado por estarem associadas ao desfecho clínico da doença
Introduction:
Triple negative breast cancer (TNBC) corresponds to 10 to 20% of invasive breast carcinoma with high aggressiveness and in most cases has only standard chemotherapy as treatment. Inflammatory cytokines are heterogeneous group of soluble proteins produced by different types of cell, that mediate and regulate the immune system. The cellular immune response is regulated by accessory proteins called co-stimulatory and co-inhibitory receptors, such as 4-1BB and TIM-3, respectively. The search for biomarkers that can predict response to neoadjuvant chemotherapy (NAC) is still a challenge to medicine. Objective:
To evaluate the soluble levels of sTIM-3 and s4-1BB, and inflammatory cytokines in the blood of women with locally advanced triple negative breast cancer, and to associate them with disease-free survival and the type of pathological response to NAC. Methods:
The study was carried out between the years 2015 and 2017 at the Hospital de Cancer de Pernanbuco (HCP) and Translational Research Laboratory of the Instituto de Medicina Integral Prof. Fernando Figueira (IMIP). Twenty-nine women, between 18 and 60 years old, diagnosed with locally advanced TNBC, and submitted to NAC, and 30 healthy women were included. Peripheral blood samples were taken before and after neo QT. The determination of the soluble levels of s4-1BB and sTIM-3 was performed by enzyme linked immunonosorbent assay (ELISA). The measurements of IL-1β, IL-6, IL-8, TNF-α and IL-10 were performed using the Cytometric Bead Array by flow cytometry. The level of statistical significance was p <0.05. Results:
There were higher levels of IL-6 and IL-10 in the group of patients with tumor size T4 compared to groups T2-T3 (p <0.05). High levels of IL-6, IL8, IL-10 and TNF-α were found in the TNBC group with lymph node status in N2 in relation to N0 and N1 (p <0.05). High levels of IL1β, IL-6, IL-10 and TNF-α were observed in the group with partial pathological response (PR) when compared to groups with complete pathologial response (RC) and controls (p <0.05). With regard to IL-8 levels, the groups of CR and RP patients showed high levels when compared to controls (p <0.05). There was no significant difference in IL-8 between the CR and PR groups. No significant differences were observed in the levels of s4-1BB and sTIM-3 in accordance with primary tumor and lymph node status. High levels of s4-1BB were observed in the RC group compared to the PR and control groups (p <0.0004 and p <0.0001, respectively). As well, the levels of sTIM-3 were higher in patients with CR and PR compared to controls (p <0.0001 and p <0.0003, respectively). In the analyses of disease-free survival (DFS) with 24 months of follow-up, we used as a cut-off point the median value (< or ≥ 50th percentile) of the soluble levels of sTIM-3 and s4-1BB. There were no significant differences in DFS at 24 months between groups with levels of s4-1BB ≥ 122 and <122 pg/mL. The DFS was 93.33% in the group with sTIM-3 levels <2874 pg/mL and 60% in the group with levels ≥ 2874 pg/mL (p = 0.03). Conclusion:
s4-1BB was a good predictive indicator of response to NAC, while elevation of sTIM-3 levels was shown to be associated with the risk of locoregional recurrence and distant metastases. Both TIM-3 and 4-1BB appear to be potential therapeutic targets in locally advanced TNBC because they were associated with the clinical outcome of the disease