Identificação de Biomarcadores de Angiogênese no Eritema Nodoso Hansênico e na HansenÃase
Publication year: 2020
Theses and dissertations in Portugués presented to the Instituto Oswaldo Cruz to obtain the academic title of Mestre. Leader: Pereira, Veronica Schmitz
A hansenÃase é uma doença infecciosa de evolução crônica, porém o curso natural da doença pode ser interrompido por episódios reacionais agudos que são caracterizados por uma ativação da resposta inflamatória acelerando o agravamento no dano tecidual e neural. O Eritema Nodoso Hansênico (ENH), um desses episódios reacionais, é uma complicação imunológica grave que acomete os pacientes multibacilares (BL e LL). A presença de neutrófilos na lesão de pele dos pacientes com ENH é considerada uma marca histológica dessa reação, porém ainda não é claro como ocorre o recrutamento desses neutrófilos para o sÃtio inflamatório e como este tipo celular participa dos mecanismos patológicos. Já foi visto na literatura que a angiogênese está presente de forma aumentada em lesões de pele de pacientes lepromatosos (LL) com e sem ENH sendo associada ao aumento da carga bacilar e progressão da doença. Embora o mecanismo de formação de novos vasos tenha sido bastante estudado na hipóxia tecidual e em outros processos inflamatórios, na hansenÃase ainda não está bem descrito. Levando em consideração que a angiogênese está presente nos achados histopatológicos da hansenÃase LL e no ENH, esse estudo propõe avaliar os nÃveis proteicos e a expressão gênica de VEGF-A, VEGFR1, PDGF, HIF1A e ITGB3 em amostras de sangue e pele de pacientes LL com e sem ENH e controles (pacientes BT e doadores sadios). 13 pacientes BT e 28 LL antes de iniciar o tratamento com a poliquimioterapia e 23 pacientes ENH antes do inÃcio do tratamento anti-reacional, 13 pacientes ENH 7 dias após o inÃcio do tratamento com talidomida e 3 doadores sadios foram recrutados no Ambulatório Souza Araújo, Rio de Janeiro.
Os nÃveis séricos de VEGF-A e PDGF-BB foram determinados por ELISA. A expressão proteica de VEGFR1 na superfÃcie de neutrófilos circulantes foi determinada por citometria de fluxo multiparamética. A expressão de RNAm de VEGF-A, PDGF-A, HIF1A e ITGB3 na pele foram determinadas por RT-qPCR. Os nÃveis circulantes de VEGF-A em pacientes LL foram significativamente aumentados quando comparados com pacientes BT. Pacientes LL com e sem ENH apresentaram nÃveis séricos de VEGF-A comparáveis, porém 7 dias após o inÃcio do tratamento com talidomida houve redução. Neutrófilos circulantes de pacientes BT apresentaram maior expressão de VEGFR1 quando comparados com pacientes LL. Os neutrófilos de pacientes LL apresentaram nÃveis de VEGFR1 similares aos neutrófilos de doadores sadios. A expressão de VEGFR1 em neutrófilos assim com a frequência de neutrófilos VEGFR1+ foi menor em pacientes ENH quando comparados a todos os grupos de pacientes e doadores saudáveis. Os nÃveis de RNAm de VEGF-A foi significativamente maior na pele de pacientes ENH quando comparados aos pacientes BT e LL não reacionais. A expressão gênica de HIF1A foi maior nas lesões de pele de pacientes ENH quando comparados com LL e BT. Os nÃveis de PDGFA e ITGB3 nas lesões LL com e sem ENH foram comparáveis. Os nossos resultados sugerem que neutrófilos de pacientes ENH migrem para as lesões de pele através da via VEGF-A/VEGFR1 e que a angiogênese detectada nas lesões de pele de pacientes ENH induzem a expressão de HIF. (AU)