Análise da relação entre a expressão de marcadores de células tronco tumorais (ALDH-1 e SOX-2) e as características clinico patológicas de neoplasias de glândulas salivares
Analysis of the relationship between the expression of tumor stem cell markers (ALDH-1 and SOX-2) and the clinicopathological characteristics of salivary gland neoplasms
Publication year: 2019
Theses and dissertations in Portugués presented to the Universidade Federal do Rio Grande do Norte to obtain the academic title of Doutor. Leader: Souza, Lelia Batista de
Os mecanismos moleculares e celulares que estão associados a patogênese, baixa resposta
ao tratamento, recidiva e óbito em tumores de glândula salivar não são totalmente
conhecidos. Nesse sentido, é importante ressaltar que as células-tronco (CT) dentro de
um tumor (CTT) estão relacionadas com a tumorigenicidade e progressão em neoplasias
humanas. Diante do exposto, o objetivo desse trabalho foi avaliar a expressão de
marcadores relacionados às CT (ALDH-1 e SOX-2) em neoplasias de glândula salivar e
verificar se suas expressões apresentam associação com dados clinicopatológicos e
desfecho dos pacientes. Foram selecionados 103 casos de neoplasias malignas (25 CME;
15 CCA; 13 CAC; 10 ACP; 13 ACSOE; 8 CEME; 7 CAEXAP; 5 CDS; 4 ACCB; 3 CCC)
e 51 casos de neoplasias benignas (25 AP; 9 MIO; 7 TW; 5 ACA; 5 ACB). Os dados
obtidos foram analisados no software Statistical Package for Social Science, GraphPad
Prism e STATA. O nível de significância de 5% foi adotado para os testes estatísticos
(p<0.05). Os pacientes do estudo foram principalmente do sexo masculino, com média
de idade de 52 anos; a parótida foi o sítio anatômico mais afetado. A maioria das
neoplasias malignas, foi classificada como T1-T2, N0 e M0. A expressão das proteínas
foi avaliada através de imuno-histoquímica e confirmadas por meio de Western-blot,
verificando-se que os resultados foram semelhantes entre as técnicas e que estavam
correlacionados estatisticamente, tanto para SOX-2 (p<0.001) quanto para ALDH-1
(p=0.039). Em relação a expressão da SOX-2, a maioria dos tumores benignos foi
negativa (n=39; 76.5%), sendo constatada expressão apenas nos tumores sem
diferenciação mioepitelial (ACA e TW) (p<0.0001). Em contraparte a maioria dos
tumores malignos estudados foi positiva para SOX-2 (n=54; 52.4%) sendo esse resultado
estatisticamente significativo (p=0.002). Também foi evidenciada que essa expressão
ocorreu em casos sem diferenciação mioepitelial (p=0.006) principalmente em CME e
CCC. Não foram evidenciadas associações estatisticamente significativas entre a
expressão de SOX-2 e parâmetros clínicos. A proteína ALDH-1 esteve frequentemente
expressa no parênquima de neoplasias malignas (n=88; 85.6%) e benignas (100%). De
maneira geral, a expressão da ALDH-1 no parênquima não se associou com parâmetros
clínicos das neoplasias malignas, entretanto, os casos de CME com alta expressão no
parênquima estavam associados com tumores de estadiamento clínico avançado
(p=0.047). Foi constatada expressão da ALDH-1 em células do estroma tumoral,
principalmente de neoplasias malignas (n=67; 65.0%), estando associada com metástase
em linfonodos (p=0.032), estadiamento clínico avançado (p=0.008), recorrência tumoral
(p=0.006) e óbito (p=0.013). A sobrevida global e livre de doença em 5 e 10 anos foi
menor em pacientes diagnosticados com CAC, estadiamento clínico avançado, que
apresentaram recorrência e com expressão estromal de ALDH-1. Destaca-se que na
análise multivariada, o estadiamento clínico avançado e expressão estromal da ALDH-1
representaram fatores prognósticos independentes na sobrevida livre de doença. Com
base nos resultados apresentados pode-se concluir que o perfil que caracteriza as CTT
apresenta variações nos diferentes tumores de glândula salivar. A expressão diferencial
da SOX-2 e ALDH-1 nessas neoplasias sugere que existem subtipos diferentes de CTT
que podem ser ativadas por vias moleculares distintas. Conclui-se também que a presença
de marcação estromal para ALDH-1 caracteriza células com perfil de CT mesenquimais
que podem estar diretamente relacionada com o comportamento biológico e progressão
de tumores malignos em glândula salivar (AU).
The molecular and cellular mechanisms that are associated with pathogenesis, poor
treatment response, recurrence, and death in salivary gland tumors are not fully known.
In this matter, stem cells (SC) within a tumor (TSC) are related to tumorigenicity and
progress in human neoplasms. As such, the aim of this study was to evaluate the
expression of SC-related markers (ALDH-1 and SOX-2) in salivary gland neoplasms and
their possible association with clinicopathological data and patient outcomes. We selected
103 cases of malignant neoplasms (25 mucoepidermoid carcinoma; 15 acinic cell
carcinoma; 13 adenoid cystic carcinoma; 10 polymorphous adenocarcinoma; 13
adenocarcinoma NOS; 8 epithelial-myoepithelial carcinoma; 7 carcinoma ex
pleomorphic adenoma; 5 salivary duct carcinoma; 4 basal cell adenocarcinoma; 3 clear
cell carcinoma) and 51 cases of benign neoplasms (25 pleomorphic adenoma; 9
myoepithelioma; 7 Warthin tumor; 5 canalicular adenoma; 5 basal cell adenoma). Data
were analyzed in Statistical Package for Social Science, GraphPad Prism and STATA
softwares. A significance level of 5% was adopted for the statistical tests (p<0.05). Most
patients were male, with a mean age of 52 years, and the parotid was the most common
anatomical site. Most malignant neoplasms were classified as T1-T2, N0 and M0. Protein
expression assessed by immunohistochemistry and confirmed by western blot showed
similar results that were statistically correlated for both SOX-2 (p<0.001) and ALDH-1
(p=0.039). Regarding the expression of SOX-2, most benign tumors were negative (n=39;
76.5%), and expression was only observed in tumors without myoepithelial
differentiation (p<0.0001). In the other hand, most of the malignant tumors were positive
for SOX-2 (n=54; 52.4%), being statistically significant (p=0.002). The expression
occurred in cases without myoepithelial differentiation (p=0.006) mainly in
mucoepidermoid carcinoma and clear cell carcinoma. No association was found between
SOX-2 expression and clinical parameters. ALDH-1 was frequently expressed in the
parenchyma of malignant (n=88; 85.6%) and benign (100%) neoplasms. Overall, the
presence of ALDH-1 in the parenchyma was not associated with clinical data of malignant
neoplasms; nevertheless, the cases of mucoepidermoid carcinoma with high expression
in the parenchyma were associated with advanced clinical stage (p=0.047). The
expression of ALDH-1 in tumor stroma cells occurred mainly in malignant neoplasms
(n=67; 65.0%), being associated with lymph node metastasis (p=0.032), advanced clinical
stage (p=0.008), recurrence (p=0.006) and death (p=0.013). Overall survival and Diseasefree survival at 5 and 10 years were lower in patients diagnosed with adenoid cystic
carcinoma, advanced clinical stage, recurrence and stromal expression of ALDH-1.
Multivariate analysis showed advanced clinical stage and stromal expression of ALDH1 were independent prognostic factors for disease-free survival. Based on the results, the
profile of TSC presents variations in different salivary gland tumors. The differential
expression of SOX-2 and ALDH-1 in these neoplasms suggests that there are different
subtypes of TSC that can be activated by distinct molecular pathways. Also, the presence
of ALDH-1 stromal expression characterizes cells with mesenchymal CT profile that may
be directly related to the biological behavior and progress of malignant tumors in the
salivary gland (AU).