Desenvolvimento de um protocolo para diagnóstico de linfoma de hodgkin por citometria de fluxo multiparamétrica

Santos, Amanda Oliveira dos

O linfoma de Hodgkin (LH) é o câncer mais comum entre adolescentes na faixa dos 15 aos 19 anos. De todos os casos, cerca de 95% correspondem a casos de linfoma de Hodgkin Clássico (LHC). Para o diagnóstico desta neoplasia, o método padrão ouro compreende a avaliação morfológica associada a avalição imunohistoquímica, que demandam tempo. Embora a citometria de fluxo multiparamétrica (CFM) seja o método de escolha para a diagnóstico das leucemias e linfomas não-Hodgkin, sua utilidade no diagnóstico de LHC foi estabelecida somente nos anos 2000. Este estudo propõe a CFM como método auxiliar para acelerar a identificação das células Hodgkin/Reed-Sternberg (H/R-S) e tem como principal objetivo selecionar, dentre os anticorpos estudados, aqueles que apresentam maior poder de discriminação entre as células neoplásicas e as células do infiltrado imune. Foram analisadas 100 amostras de 79 pacientes com suspeita de linfoma, por meio da marcação de 12 anticorpos monoclonais, distribuídos em duas combinações distintas.

A primeira combinação compreendeu os marcadores:

CD3, CD5 ou HLADR, CD15, CD20, CD30, CD45, CD56 e CD123.

Enquanto a segunda combinação compreendeu:

CD15, CD30, CD40, CD45, CD56, CD95, nuPAX5 e FVS780. Após avaliação, foi possível estabelecer que os anticorpos que apresentam maior poder de discriminação foram: CD30, CD45, CD15, CD20, CD40, CD95 e nuPAX5. Quando comparada aos métodos padrão ouro de diagnóstico, a primeira combinação de anticorpos apresentou sensibilidade de 51%, especificidade de 100%, valor preditivo positivo de 100% e valor preditivo negativo de 90%, resultando na acurácia de 91%. Já na segunda combinação, a sensibilidade foi de 81%, especificidade de 100%, o valor preditivo positivo foi de 100% e valor preditivo negativo de 90%, o que resultou na acurácia de 93%. O número mínimo de eventos adquiridos para garantir diagnóstico por CFM também calculado e estimado em um milhão de eventos. Como desfecho adicional, este estudo se destaca como pioneiro na identificação de células H/R-S, por meio da CFM, em sítios como o sistema nervoso central, medula óssea, líquor e efusão pericárdica. Em conclusão, esse estudo corrobora que o diagnóstico de LHC por CFM é factível e destaca-se ao provar a utilidade da CFM na avaliação de infiltração em sítios raramente acometidos.(AU)

Hodgkin lymphoma (HL) is the most common cancer among adolescents aged 15 to 19. Classical Hodgkin lymphoma (CHL) comprises approximately 95% of all cases of HL. Gold standard diagnosis of CHL requires morphological and immunohistochemical evaluation, which takes time. Although multiparametric flow cytometry (CFM) is the method of choice for the diagnosis of leukemias and non-Hodgkin’s lymphomas, its usefulness in diagnosing CHL has only been established in the 2000s. This study proposes CFM as an auxiliary method to accelerate the identification of Hodgkin/Reed-Sternberg (H/R-S) cells. The main objective of this study is to determine, among the tested antibodies, those that have greater distinguishing power between neoplastic cells and cells of the immune infiltrate. A total of 100 samples from 79 patients with suspected lymphoma were evaluated through staining of 12 monoclonal antibodies, distributed between two antibody panels.

The first panel comprised the antibodies:

CD3, CD5 or HLADR, CD15, CD20, CD30, CD45, CD56 and CD123.

While the second panel comprised:

CD15, CD30, CD40, CD45, CD56, CD95, nuPAX5 and FVS780. After evaluation, CD30, CD45, CD15, CD20, CD40, CD95 and nuPAX5 were established as the antibody combination with the greatest distinguishing power. When compared to standard diagnostic methods, the first panel showed a sensitivity of 51%, specificity of 100%, positive predictive value of 100% and negative predictive value of 90%, leading to an accuracy of 91%. In the second combination, the sensitivity was 81%, the specificity was 100%, the positive predictive value was 100% and the negative predictive value was 90%, which resulted in an accuracy of 93%. The minimum number of events acquired to guarantee diagnosis by CFM was also calculated and estimated at one million events. As an additional outcome, this study is the first in our knowledge, to identify H/R-S cells through CFM in sites such as the central nervous system, bone marrow, cerebrospinal fluid and pericardial effusion. In conclusion, this study confirms that the diagnosis of LHC by CFM is feasible and stands out by proving its usefulness in evaluating infiltration in rarely affected sites.(AU)