Evaluación de metodologías del ADN recombinante para diagnóstico de P. falciparum, en comparación con los examenes microscópico
Publication year: 1994
Theses and dissertations in Español presented to the Universidad de Carabobo. Facultad de Ciencias de la Salud. Area de Estudio de Postgrado. Escuela de Malariología y Saneamiento Ambiental to obtain the academic title of Master. Leader:
Desde 1984, se ha reportado el uso diagnóstico con una alta sensibilidad de una secuencia altamente repetitiva de 21 pb específica para P. falciparum. Considerando la organización genómica de esta secuencia, que se encuentra en repetidos de 21 pb en tanda, en regiones sub-teloméricas con bloques invertidos, ha sido diseñado un ensayo de PCR (I) Pf-21, con un oligonucleótido único, altamente sensible y específico, acoplado a una hibridación y revelado por métodos no radiactivos para la detección de P. falciparum, en muestras de sangre de pacientes de Tumerebo-Bolívar y en ADN purificado de diferentes aislados provenientes de Brasil y Colombia. Con este sistema de PCR y la optimización de un protocolo para el tratamiento de la muestra utilizando Chelex-100-iron, se ha podido diagnósticar, correctamente P. falciparum. Cuando el ensayo fue comparado con el diagnóstico de gota gruesa y extendido coloreado com Giemsa, se mejoró la sensibilidad del método tradicional en una r=2,7:1 y sobre infecciones mixtas en una r=5:1. Esta aproximación además de proporcionar una alternativa al diagnóstico epidemiológico de P. falciparum, ha permitido obtener patrones de fragmentos amplificados distintos, para aislados de diferente origen geográfico. Estos resultados constituyen una importante herramienta en la epidemiología de la malaria, ya que permitirá masificar el diagnóstico y hacer un reconocimiento de las distintas cepas circulantes en las áreas endémicas venezolanas