Estudo comparativo entre as técnicas fotocolorimétrica e fluorimétrica na determinaçäo da taxa de hidroxiprolina em amostras teciduais hidratadas e desidratadas
Publication year: 1995
Theses and dissertations in Portugués presented to the Universidade Federal do Paraná. Curso de Pós-Graduaçäo em Clínica Cirúrgica. Setor de Ciências da Saúde to obtain the academic title of Doutor. Leader:
O presente estudo objetiva avaliar, comparativamente, as técnicas fotocolorimétrica e fluorimétrica, na determinaçäo da taxa de hidroxiprolina encontrada em hidrolisados protéicos a partir de amostras teciduais näo cicatriciais. A técnica fotocolorimétrica utilizada foi a proposta por IBBOTT (1974). A técnica fluorimétrica adotada foi descrita por Felix, Toome e DeBernardo (1975) e adaptada para as condiçöes do Laboratório do Instituto de Tecnologia do Paraná. O procedimento experimental constou da retirada e armazenamento de fragmentos teciduais de duodeno, jejuno e colo descendente de dois cäes. As amostras teciduais foram pesadas e a metade delas submetida à desidrataçäo em estufa a 80§C. Em seguida, as amostras teciduais hidratadas e desidratadas foram submetidas à hidrólise ácida, sendo que em seguida, os hidrolisados teciduais foram processadas bioquimicamente para a determinaçäo da taxa de hidroxiprolina tecidual conforme duas técnicas distintas: a primeira, fotocolorimétrica (utilizando o reativo de Ehrlich e análise em leitor de microplacas) e a segunda, fluorimétrica (mediante descarboxilaçäo oxidativa com N-clorosuccianamida e uso de fluorescamina em cromatografia líquida de alta pressäo). A análise dos resultados obtidos a partir das soluçöes-padräo de trabalho de hidroxiprolina apresentou a correlaçäo r=0,9970 na técnica fotocolorimétrica e r=0,9962 na técnica fluorimétrica. A taxa de hidroxiprolina média encontrada na técnica fotocolorimétrica foi de 3,303 mg/g de tecido para as amostras hidratadas e de 12,193mg/g de tecido para as amostras desidratadas; na técnica fluorimétrica, estas taxas foram de 4,217 mg/g de tecido e 12,018 mg/g de tecido, respectivamente. Nas amostras processadas como pool pela técnica fotocolorimétrica, a taxa de hidroxiprolina tecidual foi de 3,889mg/g de tecido nas amostras hidratadas e de 12,500 mg/g de tecido nas amostras desidratadas; na técnica fluorimétrica estes resultados formam 2,622mg/g de tecido e 13,500 mg/g de tecido, respectivamente. Näo houve diferença significante entre estes resultados. Ambas as técnicas apresentaram tempo de processamento em laboratório semelhante