A determinaçao da produçao antígeno-específica de citocinas por linfócitos T após imunizaçoes é tarefa difícil devido à baixa freqüência de células específicas circulantes. Na intençao de detectar estas citocinas após infecçao e vacinaçao, foi analisado o perfil de produçao intracelular de citocinas utilizando metodologia baseada em citometria de fluxo após expansao dos linfócitos com antígeno e subseqüente re-estimulaçao com mitógenos. Células mononucleares de sangue periférico criopreservadas foram descongeladas e estimuladas com antígenos específicos por oito a 10 dias e subseqüentemente re-estimuladas com mitógenos por cinco a seis horas. A produçao de citocinas foi entao detectada por citometria de fluxo com o uso de anticorpos monoclonais específicos marcados com fluorocromos, após fixaçao com paraformaideído e permeabilizaçao com saponina. Após a expansao com antígenos e re-estimulaçao com mitógenos, as células nao aderentes eram constituídas principalmente de linfócitos T (>92 por cento ), dos quais 98 por cento expressaram o marcador de ativaçao celular CD69. A detecçao de IL-4 e IFNY concentrou-se nas células de memória, que apresentavam o fenótipo CD45RO+. A produçao de ambas as citocinas foi confirmada pela detecçao de RNAM através do ensaio de proteçao de ribonucleases e microscopia de imunofluorescência confocal. Estes métodos foram aplicados para avaliar infecçao pregressa por citomegalovírus (CMV) e herpes simples(HSV) . Foi detectada produçao antígeno-específica de IFNY e IL-4 em linfócitos de indivíduos soropositivos para o CMV, enquanto que somente foi detectada a produçao antígeno-específica de IFNY em linfócitos CD8- de indivíduos soropositivos para HSV. Para estudar a capacidade destes métodos em detectar a produçao antígeno-específica após vacinaçao, eles foram aplicados em um protocolo clínico de uma vacina experimental anti-HIV-1. Foi observado um aumento na produçao antígeno-específica de IFNY após uma e duas doses da vacina, que corresponderam à produçao de anticorpos, proliferaçao linfocitária e reaçao intradérmica. Portanto, estes métodos mostraram-se promissores para avaliar a produçao antígeno-específica de citocinas em situaçoes clínicas