Caracterizaçäo de antígenos específicos de Leishmania (Viannia) braziliensis reconhecidos por anticorpos monoclonais
Publication year: 2000
Theses and dissertations in Portugués presented to the Universidade Federal de Säo Paulo. Escola Paulista de Medicina to obtain the academic title of Doutor. Leader:
Foram produzidos anticorpos monoclonais que reconhecem promastigotas de L. (V.) braziliensis, denominados SST-1, SST-2, SST-3 e SST-4. Estes MoAbs foram analisados juntamente com os MoAbs ST-3, ST-4 e ST-5 (STRAUS et ai., 1993) quanto a reatividade com L. (V.) braziliensis, por técnicas de, radioimunoensaio em fase sólida, imunofluorescência indireta e "Western blotting" imunocoloração de HPTLC. Em L. (V.) braziliensis os MoAbs SST-1, ST-3 e ST-5 reconhecem glicolipídeos. Por imunofluorescência indireta verificou-se que os antígenos reconhecidos estão localizados na superfície do promastigota, e por imunoeletromicroscopia observa-se marcação de superfície em forma de "patches". O MoAb SST-1 reconhece glicolipídeos de promastigotas de L. (V.) braziliensis (serodemas l a 7), L. (V.) naiffi e L. (V.) guyanensis. Não foram detectados glicolipídeos reconhecidos pelo MoAb SST-1 em amastigotas de L. (V.) braziiiensis, em promastigotas de L. (V.) panamensis e L. (V.) lainsoni, em amastigotas e promastigotas de L. (L.) amazonensis, L. (L.) major e L. (L.) chagasi e epimastigotas de T. cruzi. Os MoAbs ST-3 e ST-5 são também reativos com formas promastigotas de L. (V.) braziliensis, reconhecendo componentes glicolipídicos distintos daqueles reconhecidos pelo MoAb SST-1. A importância dos epítopos reconhecidos pelos MoAbs SST-1, ST-3 e ST-5 para a infectividade do parasita foi analisada em cultura de macrófagos infectados com promastigotas de L. (V.) braziliensis. Somente os fragmentos Fab dos MoAbs ST-3 e ST-5 inibiram significativamente a infecção dos macrófagos, corroborando a importância dos epítopos Galb1-3Gal na interação parasita-macrófago. Por outro lado, o epítopo reconhecido pelo MoAb SST-1 parece não estar envolvido nesta interação. O MoAb SST-2 reconhece um "doublet" de 24-28kDa e um componente de 72kDa, cujo epítopo é conformacional. Verificou-se alta marcação por imunofluorescência e por imunoeletromicroscopia de toda superfície do parasita O MoAb SST-3 reconhece um "triplet" de natureza glicoprotéica, de 160, 170 e 180 kDa cuja reatividade é abolida por tratamento com m-periodato, indicando que o epítopo é carboidrato. Por imunofluorescência e imunoeletromicroscopia observa-se marcação restrita a membrana do flagelo do parasita...(au)