Exploramos a especificidade da catepsina B recombinante humana expressa em levedura, Pichia pastoris. Sintetizamos e caracterizamos dois tipos de substratos de fluorescência interna apagada, isto é, um formado por Abz-Dnp e outro por Trp-Dnp (Abz= acido oito-aminobenzoico, Trp=triptofano, Dnp= 2,4-dinitrophenila). como pares doador-aceptor de fluorescência, todos com a carboxila C-terminal livre. Preparamos três séries de substratos, usando como referência os seguintes peptídeos: AbzFRDap(Dnp)[ ou K(Dnp)]P-OH, Abz-GFFRK(Dnp)W-OH e Dnp-GFRFW-OH. Fizemos o estudo da cinética de hidrólise destes peptídeos e determinamos as ligaçoes clivadas para cada substrato. Isto nos garantiu que estávamos acompanhando a atividade carboxidipeptidásica. As observaçoes mais relevantes, para a especificidade da atividade exopeptidásica da catepsina B, sao as seguintes: Phe na posiçao P2 é o aminoácido preferencial Arg ou Phe na posiçao P1 mostraram ser preferenciais na' dependência do aminoácido colocado em P2'. Assim, com Pro nesta posiçao o resíduo Arg é preferencial, já com Trp em P2' tanto Arg como Phe em P1 resultaram em bons substratos. K(Dnp) ou Dap(Dnp) no lado P' nao se diferenciam quanto à geraçao de substratos eficientes para catepsina B. A natureza do aminoácido na posiçao P2' tem um efeito muito determinante na susceptibilidade dos substratos. O Trp é o resíduo preferencial nesta posiçao, e a presença de aminoácidos hidrofílicos ou carregados resulta em péssimos substratos. - Aminoácidos hidrofóbicos sao preferidos na posiçao Pi'.,_(au