Objetivo:

O carrapato Boophilus microplus causa grandes prejuízos econômicos à exploraçao pecuária brasileira em funçao da espoliaçao dos bovinos e do alto custo operacional das técnica atuais de controle. Proteínas extraídas a partir de carrapatos podem ser usadas como ferramenta no controle dos mesmos. Com o objetivo de avaliar o potencial imunoprotetor de inibidores de tripsina foram realizados estudos com inibidores de tripsina provenientes de extrato de larvas de carrapato B. microplus (BmTIs).

Métodos:

As larvas usadas nos experimentos foram provenientes de uma colônia de carrapatos mantidas livre de hemoparasitos. Os BmTIs foram purificados por cromatografia de afinidade tripsina-Sepharose e troca iônica associadas, suas massas moleculares avaliadas por eletroforese em gel de SDS-poliacrilamida e sua capacidade inibitória foi caracterizada por zimografia reversa. A dosagem de inibiçao foi realizada para diferentes enzimas. A avaliaçao da imunoproteçao dos bovinos contra os carrapatos foi realizada pela imunizaçao dos bovinos com 100 mg do antígeno (BmTIs) com três aplicaçoes subcutâneas, após 15 dias da inoculaçao os animais foram desafiados por meio da infestaçao com 20 OO0 larvas de B. microplus. Os anticorpos policlonais dos bovinos foram dosados por teste de ELISA. Os resultados foram avaliados com tratamento estatístico nao paramétrico.

Resultados:

Os inibidores apresentaram dois grupos de acordo com as massas moleculares: 18 e 10 kDa (SDS-PAGE). O inibidor de 18 kDa apresentou constantes de inibiçao - Ki(s) de: 0,4 nM, 3,5 nM e 35 nM para tripsina, elastase de neutrófilo e calicreína plasmática, respectivamente. O inibidor nao alterou os tempos de protrombina (TP) e trombina (TT), mas prolongou em três vezes o tempo de tromboplastina parcialmente ativada (TTPA). Quando os inibidores foram avaliados no período de vida livre desde o início da postura dos ovos até a larva infectante, o Ki para elastase de neutrófilo melhorou em 10 vezes. A seqüência de aminoácidos N-terminal do inibidor majoritário presente em larva infectante foi: AVDFDKGCVPTADPGPCKG. A avaliaçao do desenvolvimento da larva mostrou uma eficiência de 72,8 por cento de imunizaçao reduzindo o número de carrapatos e o peso dos ovos quando comparados com o grupo controle.

Conclusoes:

As diferenças de atividade de inibiçao nas diferentes fases sugerem que os BmTIs podem desempenhar diferentes papéis durante o processo de desenvolvimento. Os anticorpos gerados...(au)