Caracterizaçäo de anticorpos monoclonais dirigidos a lipofosfoglicano de formas promastigotas de Leishmania(Leishmania) amazonensis: papel protetor na infecçäo
Publication year: 2002
Theses and dissertations in Portugués presented to the Universidade Federal de Säo Paulo. Escola Paulista de Medicina. Curso de Ciencias da Saude to obtain the academic title of Doutor. Leader:
Este estudo analisou o papel do lipofosfoglicano (LPG) de formas promastigotas de L. (L.) amazonensis, na infectividade do parasita, utilizando anticorpos monoclonais (MoAbs) VST-1 (IgG3) e VST-2 (IgM) dirigidos contra LPG. Neste trabalho foi também utilizado o MoAb ST-3 (IgG3), produzido contra glicoesfingolipídeos de formas amastigotas, que reconhece em promastigotas de L. (L.) amazonensis a fraçao de LPG. Por imunofluorescência o MoAb VST-1 apresentou marcaçao de superfície com formas promastigotas de L. (L.) amazonenses; o MoAb VST-2 reconheceu promastigotas de L. (L.) amazonenses e L. (L.) major, enquanto que o MoAb ST-3 reconheceu formas promastigotas de L. (L.) amazonensis e L. (V.) braziliensis. Estes resultados foram confirmados por radioimunoensaio (RIA) celular. Por PAGE-SDS, foi demonstrado que LPGs de L (L.) amazonensis e de L. (L.) major apresentam-se polidispersos com pesos moleculares aparentes entre 35 e 80 kDa e entre 8 e 45 kDa, respectivamente. Por Westem 81ot, a reatividade dos MoAbs VST-1 e ST-3 com LPG purificado de L. (L.) amazonenses foi intensa, por outro lado, o MoAb VST-2 reagiu preferencialmente com LPG de L. (L.) major. Os MoAbs VST-1, VST-2 mostraram-se específicos para LPG, nao reconhecendo outras fraçoes de glicolipídeos quando analisados por RIA. f A reatividade para os MoAbs VST-1, VST-2 e ST-3 por RIA foi favorecida quando o LPG purificado foi adsorvido em superfície positiva após tratamento da placa de poliestireno com poli-L-lisina, ou em superfície contendo componentes lipídicos de membrana, como fosfatidil colina e colesterol. Foi constatado um aumento da sensibilidade do método em cerca de uma ordem de grandeza em relaçao ao ensaio tradicional, na placa de poliestireno sem tratamento prévio. Nestas condiçoes se verificou que os MoAbs VST-1 e ST-3 detectam baixas concentraçoes de LPG como 100 ng/poço, e o MoAb VST-2, cerca de 1 ng do antígeno/poço. Estudos de caracterizaçao...(au)