Clonagem, sequenciamento, expressäo e caracterizaçäo parcial da estrutura do Lopap, um ativador de protrombina da lagarta Lonomia obliqua

Publication year: 2002
Theses and dissertations in Portugués presented to the Universidade Federal de Säo Paulo. Escola Paulista de Medicina. Curso de Ciencias to obtain the academic title of Doutor. Leader:

O contato da pele humana com cerdas de lagartas Lonomia obliqua, espécie encontrada principalmente na região Sul do Brasil, causa, entre outros sintomas, urna severa sindroine hemorrágica devido a uma coagulopatia de consumo ocasionada por agentes procoagulantes (ativadores de protrombina e fator X da coagulação), presentes no veneno. O Lopap (Lonomia obliqua prothrornbin activator protease) é urna proteína de 69 kDa, ativadora de protrotnbina, purificada do extrato bruto das cerdas da taturana L. obliqua através de cromatografia de gel filtração (Sephadex G 75) e fase reversa etn HPLC (coluna C4). A proteína purificada é capaz de ativar a protrombina de forma dose-dependente. Através de análise por SDS-PAGE, observou-se que o Lopap pode ser uma molécula composta por 4 cadeias idênticas de 18 kD.a A atividade do Lopap é aumentada pela adição de íons cálcio, entretanto outros íons bivalentes, como magnésio ou zinco, não produzem o mesmo efeito. O Lopap é inibido por imbidores de serino proteases como o PMSF e Trasylol. O peptídeo fluorogênico, derivado da protrombina na região hidrolisada pela trombina (Abz-YQTFFNPRTGSQ-EDDnp), teve sua clivagem no sítio principal entre a ligação Arg-Thr.

Os parâmetros cinéticos obtidos para este substrato foram:

Kmapp de 4,5 pM, kcat de 5,32 seg 1 e wn kcatlKrnaPP1,2 x 106 M-1 s 1. O soro anti-lonômico reconhece o Lopap quando analisado através de reação cruzada por imunodifusão radial O Lopap é capaz de provocar a formação de trombos, induzir a incoagulabilidade sanguínea, a depleção do fibrinogênio e causar urna diminuição na contagem de plaquetas quando injetada na corrente sangüínea de ratos. Também foi observada congestão e hemorragia nos...(au)

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