Identificação e caracterização de genes diferencialmente expressos em hifas de Candida albicans

Publication year: 2004
Theses and dissertations in Portugués presented to the Universidade Federal de São Paulo. Escola Paulista de Medicina. Curso de Microbiologia me Imunologia to obtain the academic title of Doutor. Leader:

A transição morfológica de levedura para hifa é essencial para a virulência de Candida albicans. Esta transição envolve a expressão de genes hifa-específicos que estão sob o controle de fatores transcricionais. Para descobrir genes hifa-específicos utilizamos um método de triagem diferencial, onde clones de biblioteca de DNA genômico foram hibridizados com sondas de cDNA de levedura e hifa. Dois clones com aumento de expressão em hifa foram selecionados.

O sequenciamento dos insertos destes clones permitiu a identificação de dois genes metabólicos importantes:

CaHXT7 (high-affinity hexose transporter) e CaYLL34 (da família AAA ATPase).

As regiões codificadoras completas destes genes foram caracterizadas e a análise das proteínas hipotéticas revelou que:

(1) CaHxt7p tem um domínio de transportador de hexose e (2) CaYll34p tem dois domínios AAA ATPase, com possível papel na fusão de membranas e degradação de proteínas (por exemplo, a valosina humana). Este é o primeiro estudo que demonstra aumento de expressão de genes metabólicos em hifas de C. albicans. CaYLL34 foi inativado por mutagênese insercional, utilizando o cassete HisG-URA3HisG, gerando o mutante M61. Esta linhagem apresentou alterações morfológicas acentuadas como aumento de vacúolo, de tamanho celular e diminuição na taxa de indução de hifa em todas as condições analisadas. Estes resultados mostram que a diminuição parcial dos níveis de CaYll34p celular é suficiente para afetar a morfologia celular característica, porque somente um alelo foi inativado, enquanto o outro continua funcional. Ainda, a associação dos produtos de CaHXT7 e CaYLL34 com a formação de hifas torna estas proteínas potenciais alvos para desenvolvimento de novas drogas antifúngicas

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