Estudo da variabilidade genética do HIV-1 em amostras brasileiras de doadores de sangue visando a caracterização de um painel biológico: análise dos subtipos e da resistência aos anti-retrovirais
Publication year: 2006
Theses and dissertations in Portugués presented to the Instituto Oswaldo Cruz to obtain the academic title of Doutor. Leader: Morgado, Mariza Gonçalves Tanuri, Amilcar
O estudo da infecção pelo HIV/aids compreende,entre outros,aspectos epidemiológicos,clínicos e genéticos.Com o objetivo de elaborar um painel biológico de amostras de plasma,com caracterização sorológica e molecular para o HIV-1,estudamos a variabilidade genética e dinâmica dos subtipos virais e sua implicação no desenvolvimento de novos reagentes correlacionando tempo de infecção e aparecimento de resistência aos anti-retrovirais.Amostras de plasma de 74 doadores de sangue,virgens de tratamento, das regiões N,NE,SE do Brasil foram recebidas e analisadas por um teste rápido,2 EIE e 1 IFI para a confirmação da reatividade ao HIV-1.As amostras de doadores possibilitam,por seu volume,a obtenção de um painel biológico.A discriminação das amostras de plasma quanto à infecção recente ou de longo prazo foi feita por ensaio imunoenzimático para incidência de infecção por HIV-1.O RNA de todas as amostras foi extraído,retro-transcrito e usado em PCR em 2 etapas(nested PCR)com iniciadores de síntese para as regiões env(gp120 e gp41), TR e PRO.Seguiu-se o seqüenciamento genômico das regiões env,TR e PRO para definição do subtipo genético e verificação da resistência aos anti-retrovirais pela ocorrência de mutações nas regiões da TR,PRO e env (gp41).As análises filogenéticas das regiões gp120,gp41, TR e PRO para definição dos subtipos virais foram realizadas com o programa Mega v.3.0 após alinhamento segundo o programa Clustal X.Observou-se que...Com relação...mutação T69N com perfil de resistência aos INTR e 2 amostras (2,7por cento)com o polimorfismo V82I,conferindo resistência aos IP,além de 8 amostras(12,9por cento),com padrão de resistência ao inibidor de fusão T20,descrita pela 1ªvez entre indivíduos infectados pelo HIV-1, virgens de tratamento,no Brasil.Devido à predominância de amostras do subtipo B e ao pequeno nºde genótipos não-B, não foi possível estabelecer correlações entre subtipos e mutações/polimorfismos,tampouco entre subtipos e tempo de infecção...