Plasmódios transfectados com a proteína de fluorescência verde (GFP) para ensaios de quimioterapia experimental

Publication year: 2007
Theses and dissertations in Portugués presented to the Centro de Pesquisas René Rachou to obtain the academic title of Mestre. Leader: Carvalho, Luzia Helena Carvalho

A resistência do Plasmodium falciparum aos principais antimaláricos ainda é o principalproblema no controle da malária humana. [...] Parasitos da malária transfectadoscom a Proteína de Fluorescência Verde (GFP) têm sido produzidos em sistema detransformação estável. Isso permite utilizar a fluorescência como um marcador paraidentificar os parasitos. Assim, buscou-se neste estudo determinar o uso potencial deparasitas da malária murina (P. berghei) e da malária humana (P.falciparum)transfectados com a GFP para os ensaios de quimioterapia experimental. Para osexperimentos in vivo, utilizou-se a cepa GFP-P. berghei que apresenta um geneexógeno de fluorescência verde e resistência à pirimetamina (Sultan et al. 1999).Camundongos suíço-albinos ou BALB/c foram infectados com a cepa GFP-P. bergheiou a cepa não transformada (NK65), por via intraperitoneal. Excluindo as drogas commecanismo de ação similar ao da pirimetamina, os resultados iniciais demonstraram quea susceptibilidade a diferentes classes de antimaláricos foi semelhante entre a cepa GFPP.berghei e a cepa P. berghei NK65. Demonstrou-se ainda que a virulência in vivo dacepa GFP-P. berghei foi similar a da cepa não transformada. A próxima etapa foivalidar a cepa GFP-P. berghei em um ensaio fluorimétrico para avaliar drogasantimaláricas. Para tal, os animais foram infectados com a cepa GFP-P. berghei,tratados com antimaláricos convencionais, e as parasitemias avaliadas pela citometria defluxo ou pelo método convencional de microscopia óptica. A parasitemia determinadapela citometria de fluxo se correlacionou com aquela determinada pela microscopiaóptica. Assim, os resultados permitiram concluir que a cepa GFP-P. berghei foiadequada para a triagem de drogas in vivo podendo substituir a técnica convencional demicroscopia óptica. [...] A cepa GFP-P.falciparum foi mantida emcultivo contínuo e as parasitemias das culturas foram analisadas, em paralelo, porcitometria de fluxo e microscopia óptica. Os resultados obt.

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