Efeitos imunomoduladores e atividade anti-Candida de lactobacilos com propriedades probióticas em macrófagos e em modelo invertebrado de Galleria mellonella
Publication year: 2017
Theses and dissertations in Portugués presented to the Universidade Estadual Paulista (Unesp), Instituto de Ciência e Tecnologia to obtain the academic title of Doutor. Leader: Oliveira, Luciane Dias de
Muitos produtos probióticos são compostos pela associação de lactobacilos no
intuito de potencializar seu efeito benéfico. Assim, o objetivo deste estudo foi
avaliar a imunomodulação e atividade anti-Candida causada por diferentes
combinações de suspensões probióticas em macrófagos e em Galleria
mellonella. Lactobacillus rhamnosus (LR), L. acidophilus (LA), e L. paracasei
(LP) foram suspendidos para obtenção das suspensões LR, LA, LP, LR+LA,
LR+LP, LA+LP e LR+LA+LP. Foram utilizadas suspensões de Candida
albicans (CA) ATCC 18804, C. krusei (CK) ATCC 6258 e C. glabrata (CG)
ATCC 9030. Macrófagos de camundongo (RAW 264.7) foram ativados por
cada suspensão de lactobacilos e desafiados por cada uma das cepas fúngicas.
Foram investigadas taxa de fagocitose, produção de citocinas e óxido nítrico e a
viabilidade celular. A melhor suspensão probiótica para cada cepa fúngica seria
usada nos testes in vivo, com G. mellonella, no entanto, devido à baixa
virulência das espécies não-albicans, os testes in vivo prosseguiram com CA e
LR.
Duas cepas clínicas de CA foram acrescentadas:
21 e 60. Suspensões de LR foram injetadas na hemolinfa das larvas 24 h antes do desafio com as cepas fúngicas. Foram determinadas curva de sobrevivência, contagem de UFC/mL das cepas de C. albicans e de hemócitos. Os resultados foram analisados estatisticamente de acordo com a distribuição normal (ANOVA e Tukey ou Kruskal-Wallis e Dunn) e a curva de sobrevivência pelo teste de Log-rank (Mantel-Cox), p<0,05. As melhores suspensões para CA, CK e CG foram LR (com melhores resultados no perfil de citocinas), LP e LA (com melhores resultados sobre a fagocitose), respectivamente. Em G. mellonella, a suspensão de LR proporcionou aumento da percentagem de sobrevivência e do número de hemócitos e diminuição da contagem de UFC/mL em todos os grupos com diferenças estatisticamente significantes. Sendo assim, pode-se concluir que as suspensões de lactobacilos possuem potencial imunomodulador cepa dependente mas sua mistura não favorece essa qualidade. Além disso, possuem atividade anti-Candida, demonstrada pela diminuição na contagem de Candida(AU)
Many probiotic products are composed by association of lactobacilli in order to
potentiate their beneficial effect. Therefore, the objective of this study was
evaluating the immunomodulation and anti-Candida activity caused by different
combinations of probiotic suspensions in macrophages and in Galleria
mellonella. Lactobacillus rhamnosus (LR), L. acidophilus (LA) and L. paracasei
(LP) were suspended to obtain the suspensions LR, LA, LP, LR + LA, LR + LP,
LA + LP and LR + LA + LP. Suspensions of Candida albicans (CA) ATCC
18804, C. krusei (CK) ATCC 6258 and C. glabrata (CG) ATCC 9030 were used.
Mouse macrophages (RAW 264.7) were activated by each suspension of
lactobacilli and then challenged by each fungal strain. Phagocytosis, cytokine
and nitric oxide production and cell viability were investigated. The best
lacobacilli suspension for each fungal strain would be used in the in vivo assays
with G. mellonella, however, because of low virulence of the non-albicans
species, in vivo tests were performed with CA and LR.