Efeitos da combinação do fator de crescimento de fibroblastos básico e fator de transformação de crescimento beta na proliferação, expressão de genes para colágeno tipos I e III, metaloproteases-1 e -2 e TIMPs 1,2 e 3, e na modulação da síntese destes próprios fatores de crescimento pelas células do ligamento periodontal de humanos
The effects of association of basic fibroblast growth factor and transforming growth factor beta on the proliferation, expression of colagen type I e III, matrix metalloproteinases-1 e -2 e TIMPs 1,2 and 3, and on the modulation of the syntheses of these growth factors by humans periodontal ligament cells
Publication year: 2005
Theses and dissertations in Portugués presented to the Universidade Estadual Paulista. Faculdade de Odontologia to obtain the academic title of Doutor. Leader: Abi Rached, Ricardo Samih Georges
O objetivo do presente estudo avaliar o efeito da combinação do fator de crescimento
de fibroblastos básico (b-FGF) e fator de transformação de crescimento beta (TGFbeta) na proliferação, expressão de genes para colágeno tipos I e III, metaloproteases -1 e –2 e TIMPs 1, 2 e 3, e na síntese destes próprios fatores de crescimento pelas células do ligamento periodontal de humanos. Para a realização do estudo, as células em diferentes concentrações, de acordo com cada experimento, foram tratadas com os fatores de crescimento nas concentrações de 1.0ng e 10ng/ml de meio de cultura para o b-FGF e para o TGF-β, tanto isoladamente quanto associados. A avaliação da proliferação celular foi realizada após os períodos de 24 e 48h na presença dos fatores de crescimento, através da mensuração do nível de MTS reduzido a formazan pelas células viáveis, e a síntese de b-FGF e TGF-β pelo teste ELISA empregando a técnica "sandwich". A expressão de genes para colágeno tipos I e III, metaloproteases-1 e -2 foi avaliada pela técnica de RT-PCR. O teste ANOVA mostrou haver diferenças estatisticamente significantes para proliferação e síntese de bFGF (p<0.05) entre os tratamentos. O teste de Comparação Múltipla de Bonferroni mostrou que todas as associações aumentaram a proliferação celular e a síntese de bFGF (p<0.001). Isoladmente, só o TGF-β foi capaz de estimular a proliferação, independente do tempo e da dose (p<0.001), enquanto que, somente o bFGF estimulou a síntese dele próprio de maneira dose-dependente (p<0.05). Em relação à síntese de TGF-β, apenas a associação das menores doses de cada fator, foi capaz de modular a síntese dele mesmo. O teste de Kolmogorov- Smirnov mostrou haver diferenças estatisticamente significantes quanto à expressão de genes entre o uso isolado dos fatores de crescimento (p<0.1), já que o bFGF aumentou a expressão de MMP-1 e MMP-2 e reduziu para Col I e III, e TIMPs1, 2 e 3, enquanto que, o TGF-β atuou de maneira inversa. Todas as associações apresentaram efeito semelhante ao uso isolado do TGFβ, com exceção da associação de 10ng de bFGF com 1ng de TGF-β, na qual prevaleceu o efeito do bFGF. Conclui-se que as associações do bFGF e do TGF-β atuaram de maneira dose-dependente no estímulo a proliferação celular, o aumento na expressão de genes para colágeno e TIMPs, e redução para as metalproteases e, modulação da síntese deles próprios
The aim of this study was to evaluate the effect of association of basic fibroblast growth factor and transforming growth factor beta on the proliferation, expression of colagen type I e III, matrix metalloproteinases-1 e –2 e TIMPs 1, 2 e 3, and on the modulation of the syntheses oh these growth factors by humans periodontal ligament cells. Different concentrations of cells, according to experiment, were incubated on the presence of 1.0 or 10 ng/ml of DMEM of growth factors, associated or no. The cellular proliferation was evaluated to 24 and 48 hours of incubation by the colorimetric method. The synthese of bFGF and TGF-β was verificated by ELISA method, using a “sandwich” techinique, and mRNA expression by Real Time - PCR. ANOVA test results indicated significant differences on the proliferation and bFGF synthesis (p<0.05) among the treatments. Bonferroni for pairwise comparition test results showed that all association estimulated the proliferation and bFGF synthesis (p<0.001). Alone, only TGF-β can stimulate the proliferation to both concentrations and periods (p<0.001), and only bFGF stimulated its own synthesis by dosedependent manner (p<0.05). Only the asssociation of 1ng of each growth factor can
stimulate the synthesis of TGF-β. Kolmogorov-Smirnov test results indicated significant differences on the expression of mRNA among treatment with the isolated growth factors (p<0.1). Basic fibroblast growth factor increased the expression of MMP-1 e MMP-2 and reduced to collagen I e III, e TIMPs1, 2 e 3, as long as TGF-β behaved the inverse manner. All the associations had similar effect to isolated TGF-β, except the association of 10ng of bFGF to 1ng of TGF-β. In conlusion, the associations of bFGF e TGF-β influenced of dose-dependent manner on the cellular proliferation, on the increasing of the expression to collagen and TIMPs, and on the reduction to metaloproteinases and, the modulation of these own synthesis