Ação antibacteriana da cetramida associada às solucões irrigadoras sobre Enterococcus Faecalis

Nascimento, Camila Almeida

O objetivo do estudo foi avaliar a ação das soluções de hipoclorito de sódio e clorexidina associadas à cetramida e do QMiX, produto comercial que combina clorexidina, EDTA e cetramida, sobre Enterococcus faecalis (ATCC 29212) em fase planctônica e biofilme.

As soluções avaliadas foram:

G1: Hipoclorito de sódio (NaOCl) a 2,5%; G2: NaOCl a 2,5% + cetramida (CTR) a 0,2%; G3: Clorexidina (CLX) a 2%; G4: CLX a 2% + CTR a 0,2%; G5: CTR a 0,2%; G6: QMiX. Como controle negativo foi utilizada solução salina. O estudo foi dividido em dois capítulos. No capítulo 1, foi realizada a avaliação da atividade antibacteriana sobre os micro-organismos em fase planctônica e biofilme. Para o contato direto com E. faecalis em fase planctônica, 50 µl da suspensão bacteriana foram colocados em tubos contendo 1,45 mL de cada solução irrigadora ou associações e, após os períodos de 1 e 3 minutos foram utilizadas soluções neutralizantes da ação antimicrobiana dos irrigantes. Em seguida, foi realizada diluição decimal seriada e plaqueamento em meio Tryptic Soy agar (TSa). Para a indução dos biofilmes foram utilizados blocos de dentina bovina como substrato no período de 14 dias. Os biofilmes foram colocados em contato com as soluções avaliadas, e transferidos para tubos de ensaio contendo soluções neutralizantes. Após agitação por 60 segundos para a suspensão das células remanescentes, foi realizada diluição decimal seriada e plaqueamento em TSa em triplicata. A incubação foi realizada em microaerofilia a 37°C por 24 horas e a análise efetuada por meio da contagem de UFC mL-1 . Os resultados foram submetidos aos testes ANOVA e Tukey, com nível de significância de 5%. Todas as soluções irrigadoras e associações avaliadas eliminaram completamente os micro-organismos em fase planctônica. Sobre biofilme, somente NaOCl e NaOCl+CTR apresentaram 100% de eliminação bacteriana. A CLX mostrou ação semelhante à CLX+CTR, CTR e QMiX após 1 min (p>0,05). A CTR e QMiX foram similares após 3 min. CLX e CLX+CTR mostraram atividade antibiofilme comparável à NaOCl e NaOCl+CTR após 3 min, no entanto não foram capazes de eliminar os micro-organismos do biofilme. Conclui-se que a associação da CTR às soluções irrigadoras não altera a efetividade antibiofilme. No Capítulo 2, foi realizada a análise da atividadade antibiofilme das soluções irrigadoras e associações por microscopia confocal de varredura a laser. Os biofilmes de 14 dias foram colocados em contato direto com as soluções irrigadoras por 1 minuto, e após o lavagem em soluções neutralizantes, foram corados com Live/Dead® BacLight, sendo levados para a análise em microscópio confocal de varredura a laser. As imagens foram avaliadas no software BioImage_L, sendo analisados biovolume total (μm3), biovolume verde (μm3) e percentual de cobertura do substrato. Os dados foram submetidos ao teste não paramétrico de Kruskal-Wallis e de Dunn, com nível de significância de 5%. Os menores valores de biovolume total e verde foram apresentados por NaOCl e NaOCl+CTR (p<0,05). CTR e QMiX mostraram valores intermediários para o biovolume verde após sua utilização, com atividade superior à CLX e CLX+CTR (p<0,05). NaOCl e NaOCl+CTR mostraram maior capacidade de remoção de microorganismos e limpeza do substrato. QMiX não proporcionou elimiminação bacteriana sobre a dentina, com resultados intermediários. Conclui-se que NaOCl a 2,5% e NaOCl+CTR a 0,2% são os únicos irrigantes com maior atuação sobre a viabilidade, arquitetura e eliminação de biofilme

The aim of this study was to evaluate the action of conventional endodontic solutions such as sodium hypochlorite and chlorhexidine associated with cetrimide and QMiX, a commercial product composed by chlorhexidine, EDTA and cetrimide, on biofilm and planktonic phase of Enterococcus faecalis (ATCC 29212).

The evaluated solutions were:

G1: 2.5% Sodium Hypochlorite (NaOCl); G2: 2.5% NaOCl + 0.2% cetrimide (CTR); G3: 2% Chlorhexidine (CLX) 2%; G4: 2% CLX + 0.2% CTR; G5: 0.2% CTR; G6: QMiX. Saline solution was used as negative control. The study was divided into two chapters. In Chapter 1, the antibacterial activity of the solutions on microorganisms in planktonic phase and biofilm was evaluated. For direct contact with E. faecalis in planktonic phase, 50 µL of bacterial suspension were placed in tubes containing 1.45 mL of each irrigation solution or associations and after 1 and 3 minutes, neutralizing solutions were used to stop of the antimicrobial action of endodontic solutions. Decimal serial dilutions were performed and the suspensions were plated in Tryptic Soy agar medium (TSa). Dentin bovine blocks were used as substrate for induction of biofilms for 14 days. The biofilms were placed in contact with the solutions evaluated and transferred to test tubes containing neutralizing solution. After agitation for 60 seconds to suspend the remaining cells, decimal serial dilutions were performed and the suspensions were cultivated in triplicate on TSA plates. The incubation was held in microaerophilic at 37 ° C for 24 hours and the analysis was performed by counting CFU mL-1. The results were submitted to ANOVA and Tukey test, with significance level of 5%. All irrigating solutions and associations evaluated completely eradicated the microorganisms in planktonic phase. On biofilm, only NaOCl and NaOCl+CTR showed 100%- of bacterial elimination. CLX showed similar activity to CLX+CTR, CTR and QMiX after 1 min (p>0.05). CTR were similar QMiX after 3 min. CLX and CLX+CTR presented similar antibiofilm activity to NaOCl and NaOCl + CTR after 3 min, however, these solutions were not able to eradicated micro-organisms of the biofilm. It is concluded that the association of the CTR does not alter the antibiofilm effectiveness of endodontic solutions. In Chapter 2, the antibiofilm activity of endodontic solutions and associations was analysed by confocal laser scanning. Biofilms were cultivated for 14 days and then placed in direct contact with the irrigating solutions for 1 minute, after this period they were washed in neutralizing solutions and stained with dye Live/Dead® BacLight for analysis under a confocal laser scanning microscope. The images were evaluated using the software BioImage_L and the parameters total biovolume (μm 3), green biovolume (μm 3) and percent substratum coverage were evaluated. The data were were analysed to nonparametric Kruskal-Wallis and Dunn, with a significance level of 5%. The lowest values of total biovolume and green biovolume were presented by NaOCl and NaOCl+CTR (p<0.05). CTR and QMiX showed intermediate values for the green biovolume after use and higher activity than CLX and CLX+CTR (p<0.05). NaOCl and NaOCl+CTR showed better microorganism’s removal capacity and substrate cleaning. QMiX did provided bacterial elimination on dentin, with intermediate results. It is concluded that 2.5% NaOCl and NaOCl+ 0.2% CTR are the only solutions with higher acting on the viability, architecture and removal of biofilm