Cinética de expressão e localização de indutor de metaloproteínases (EMMPRIN) durante o desenvolvimento de lesão periapical induzida em camundongos
Publication year: 2013
Theses and dissertations in Portugués presented to the Universidade Estadual Paulista. Faculdade de Odontologia de Araraquara to obtain the academic title of Mestre. Leader: Faria, Gisele
Neste estudo foi avaliada a cinética de expressão, a localização do EMMPRIN e a correlação de sua expressão com a expressão das MMPs -1, -2 e -9 e com a perda óssea alveolar, durante o desenvolvimento da lesão periapical experimentalmente induzida em camundongos. Foram utilizados 40 camundongos wild-type (WT) da linhagem C57BL/6. As lesões periapicais foram induzidas nos 1os molares inferiores e após os períodos experimentais de 7, 14, 21 e 42 dias, os animais foram mortos e as mandíbulas foram removidas. Como controles foram usados 1os molares hígidos. A mensuração das lesões periapicais foi efetuada em microtomografia computadorizada. A expressão do RNA mensageiro (mRNA) do EMMPRIN, MMPs -1, -2, e -9 foi determinada por meio de RT-PCR em tempo real. A presença, a localização e a expressão do EMMPRIN e das MMPs nas lesões periapicais foram avaliadas por imunohistoquímica. Os dados foram analisados por meio dos testes ANOVA, Bonferroni e correlação de Spearman com nível de significância de 5%. Os resultados mostraram que a área da lesão periapical aumentou significativamente dos 7 para os 14 dias (83%) e a partir de então houve estabilização. No grupo controle, o EMMPRIN foi expresso fortemente nas células da camada odontoblástica da polpa dentária. Nos períodos de 7, 14, 21 e 42 dias, foram observadas imunomarcações intensas para o EMMPRIN, MMPs -1, -2 e -9 na região adjacente ao forame apical, onde havia infiltrado inflamatório denso e ocasionalmente em outras regiões da lesão periapical. O EMMPRIN, MMP-1, -2 e -9 apresentaram forte expressão em células inflamatórias mononucleares e polimorfonucleares e marcação discreta em fibroblastos. A imunoexpressão do EMMPRIN na região periapical foi maior nos períodos de 7, 14, 21 e 42 dias comparado ao controle. A expressão do gene EMMPRIN apresentou-se maior no grupo controle em relação aos 7, 14, 21 e 42 dias. A expressão do gene MMP-1 aumentou aos 7 dias e manteve-se elevada até os 42 dias. Os níveis de mRNA das MMP -2 e -9 aumentaram significativamente aos 14 dias e retornaram a níveis semelhantes ao controle em 21 dias. A imunoexpressão do EMMPRIN apresentou correlação positiva com a expressão dos genes MMP-1, -2 e -9 e com o aumento da área da lesão periapical. Concluiu-se que, na lesão periapical, o EMMPRIM é expresso por fibroblastos e principalmente pelo infiltrado inflamatório localizado próximo ao forame apical e em regiões adjacentes a esse infiltrado. A sua imunoexpressão é elevada e se correlaciona
positivamente com a expressão dos genes MMPs -1, -2, e 9 e com a perda óssea alveolar
This study evaluated the kinetics of expression and location of EMMPRIN and the
correlation of its expression with expression of MMPs -1, -2 and -9 and with alveolar bone
loss during the development of experimentally induced periapical lesions in mice. A total of
40 C57BL/6 wild-type mice (WT) were used. The periapical lesions were induced in first
lower molars. After 7, 14, 21 and 42 days, the animals were killed and the mandibles were
removed. Mice without pulp exposure served as controls. Measurement of periapical lesions
was performed in micro-computed tomography. mRNA levels of EMMPRIN, MMPs-1, -2,
and -9 were detected by real time RT-PCR. Presence, localization, and expression of
EMMPRIN and MMPs were evaluated by immunohistochemistry. Data were analyzed using
ANOVA, Bonferroni and Spearman correlation tests with significance level of 5%. The
results showed that periapical lesion area was significantly increased from 7 to 14 days (83%) and thereafter become stable. In the control group, EMMPRIN was strongly expressed in odontoblastic layer of the dental pulp. At 7, 14, 21 and 42 days there was intense immunostaining for EMMPRIN, MMPs -1, -2 and -9 in the adjacent region of apical foramen, where there was dense inflammatory infiltrate. These proteins were expressed in other parts of the periapical lesion occasionally. EMMPRIN, MMP-1, -2 and -9 were intensely expressed in mononuclear and polymorphonuclear inflammatory cells and discretely expressed in fibroblasts. In the periapical region, the EMMPRIN immunostaining was higher at 7, 14, 21 and 42 days compared with control. The expression of EMMPRIN gene was higher in control group compared with 7, 14, 21 and 42 days. The expression of MMP-1 gene increased at 7 days and stays elevated until 42 days. The mRNA levels of MMP -2 and -9 increased significantly at 14 days and returned to control level at 21 and 42 days. The EMMPRIN immunostaining was positively correlated with expression of MMP-1, -2 and -9 genes and with increasing of periapical lesion area. It was concluded that EMMPRIM is expressed by fibroblasts and mainly by inflammatory infiltrate localization near of apical foramen and adjacent regions of this infiltrate in periapical lesion. The EMMPRIN immunostaining is elevated and correlates positively with the expression of MMPs-1, -2 and 9 genes and with alveolar bone loss during development of periapical lesions