Avaliação do efeito da lectina Artin M na expressão de fatores de crescimento e citocinas inflamatórias relacionadas ao processo de repação tecidual: estudo in vitro em macrófagos e fibroblastos gengivais de ratos

Florian, Fernanda

Atualmente diversas pesquisas em Periodontia e Implantodontia visam estudar novos procedimentos e materiais que otimizem o processo cicatricial. O reparo envolve a proliferação de várias células que atuam sob a coordenação de proteínas chamadas fatores de crescimento e/ou citocinas, nos quais muitos estudos têm se concentrado e confirmado seu papel especial no processo de reparação. Artin M é uma lectina isolada de sementes de Artocarpus integrifólia e foi utilizado no tratamento tópico de lesões por queimadura de pele proporcionando aceleração da cicatrização, e redução da necrose. Em estudos recentes, foi demonstrado que o Artin M também estimulou a proliferação de fibroblastos e a reparação tecidual de lesões em mucosa palatina de ratos. Buscando um melhor entendimento da forma de atuação desta lectina, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do Artin M na expressão gênica e produção proteica de citocinas e fatores de crescimento envolvidos no processo de reparo tecidual. Culturas primárias de fibroblastos gengivais e macrófagos de rato foram tratadas com Artin M nas concentrações de 1 ; 2,5 e 5,0 μg/ml por 4, 8, 12 e 24 h para análise da expressão gênica através da reação em cadeia da polimerase após transcrição reversa de maneira quantitativa, em tempo real (RT-qPCR) e, nas mesmas concentrações por 48 e 72h após estímulo para análise quantitativa da concentração proteica dos fatores de crescimento (VEGF e TGFβ) e das citocinas pró-inflamatórias (IL-1, IL-6 e TNFα) em sobrenadante de culturas de células por meio de kits ELISA (Enzyme linked Immunosorbent Assay). Os resultados demonstraram um estímulo significativo (p<0,05; ANOVA) na expressão gênica das citocinas IL-1 e TNFα tanto pelos macrófagos como os fibroblastos. A secreção proteica dos fibroblastos gengivais demonstrou aumento nos níveis de TGFβ, enquanto nos macrófagos houve aumento para TNFα. Os resultados sugerem que o Artin M atua aumentando a expressão gênica e proteica de citocinas relevantes no processo de reparação

Currently, several studies in Periodontics and Implantology seek for new procedures and material that optimize the healing process. The healing process involves the proliferation of various cells that act under the coordination of proteins called growth factors and/or cytokines, which have been focused by many researches that have confirmed their special role in the repair process. Artin M is a lectin isolated from Artocarpus integrifolia seed and used in the topical treatment of skin burn injuries, providing accelerated healing and necrosis reduction. Recently, some studies demonstrated that Artin M also stimulates fibroblast proliferation and wound healing in rat oral mucosa. Seeking a better understanding of the lectin action, the aim of this study was to evaluate the effects of Artin M on gene expression and protein production of cytokines and growth factors involved in tissue repair. Primary cultures of rat gingival fibroblasts and macrophages were treated with Artin M at concentrations of 1, 2.5, and 5.0 µg / ml for 4, 8, 12 and 24 h for gene expression analysis by quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) and at the same concentrations for 48 and 72h for quantitative analysis of protein concentration of growth factors (VEGF and TGFβ ) and inflammatory cytokines ( IL-1 , IL-6 and TNFα ) in culture supernatants by ELISA (Enzyme linked Immunosorbent Assay). The results demonstrated significant (p < 0.05, ANOVA ) expression of IL-1 and TNF-α by macrophages as well as fibroblasts. In relation to the protein levels, gingival fibroblasts produced increased levels of TGFβ, while macrophages synthesized significant levels of TNF-α. The results suggest that Artin M has a role in the increasing gene and protein expression of relevant cytokines in the repair process