Estudio de propiedades anti-inflamatorias de extractos foliares de dos genotipos de murtilla (Ugni molinae Turcz) en fibroblastos cardiacos
Publication year: 2015
Theses and dissertations in Español presented to the Universidad de Chile to obtain the academic title of Especialista. Leader: García Nannig, Lorena
Las enfermedades cardiovasculares se caracterizan por una desregulación del proceso inflamatorio, el que se perpetúa por activación del factor transcripcional NF-κB y sobreproducción de mediadores proinflamatorios como TNF-α, IL-1β, y prostaglandinas, entre otros. Los fibroblastos cardiacos (FC) son un tipo celular crucial en la mantención estructural y funcional del tejido cardiaco ya que actúan como “células centinelas”, censando el ambiente proinflamatorio, y produciendo matriz extracelular (MEC) para reparar el daño tisular después de una injuria al corazón. El rol de los FC se ha estudiado en sepsis y es relevante en patologías asociadas a fibrosis e inflamación. Ugni molinae Turcz., Myrtaceae, es un arbusto nativo del centro y sur de Chile y de zonas aledañas de Argentina. Sus hojas se han utilizado en la medicina tradicional como antiinflamatorio y analgésica de las vías urinarias. Sus extractos foliares, como los de acetato de etilo y etanólico, tienen efectos farmacológicos comprobados tales como actividad analgésica y antiinflamatoria in vivo, y por otro lado capacidad antioxidante y actividad antibacteriana sobre microorganismos de interés clínico, entre otros. Estas propiedades son atribuidas a la presencia de triterpenos pentacíclicos y compuestos fenólicos. La gran variedad genotípica que caracteriza a esta especie es responsable de los diferentes perfiles químicos de los extractos foliares de murtilla. El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de extractos de hoja de dos genotipos distintos de murtilla, EET22-1 (extracto etanólico del genotipo 22-1) y EAE23-2 (extracto de acetato de etilo del genotipo 23-2), sobre la viabilidad celular, y mediadores pro inflamatorios regulados por NFκB en FC. Los EET22-1 y EAE23-2 se prepararon a partir de hojas secas y molidas por extracciones sucesivas con solventes de polaridad creciente como hexano, diclorometano acetato de etilo y etanol de dos genotipos elegidos por su mayor capacidad antiinflamatoria in vivo y su capacidad antioxidante. El cultivo primario fue de FC de rata neonata, mantenido en medio DMEM/F-12 con FBS 2%. Las células se estimularon con LPS 1μg/mL por 24 horas en ausencia y presencia de extracto (0,1-1-10 y 100 μg/mL). Se determinaron a) viabilidad celular por MTT, b) niveles proteicos de p65, IL-1β, COX-2 y VCAM-1 por Western blot, c) actividad de MMP-9 por zimografía y d) concentración de nitrito por reacción de Griess. Ambos extractos mantuvieron viabilidad celular hasta los 10 μg/mL, sin embargo esta disminuyó significativamente con 100 μg/mL de EAE23-2, y 500 μg/mL de EET22-1, en relación al control sin extracto; esta diferencia se atribuye a las diferencias de composición química entre ambos extractos. No se observó una disminución significativa para los grupos pre y post tratado, respecto al control LPS, en ninguno de los parámetros evaluados por Western blot a excepción del grupo pre tratado con la mayor concentración de EET22-1 para VCAM-1. Se observó un aumento en la actividad de MMP-9 en la mayoría de las condiciones. No se pudieron validar los resultados obtenidos para la cuantificación de nitrito a las 24 horas. Los dos extractos mantuvieron la viabilidad celular a concentraciones bajas y medias, siendo EET22-1 menos citotóxico a altas concentraciones. Ninguno de los extractos pudo disminuir significativamente los mediadores evaluados en este modelo celular, a las 24 horas, aunque los extractos solos no demostraron aumentar los estímulos inflamatorios a concentraciones bajas y medias. Se observó una tendencia al aumento en la actividad de MMP-9 en la mayoría de las condiciones estudiadas, lo que podría apuntar a una posible actividad antifibrótica de los extractos; son necesarias más pruebas para apoyar esta idea