Expressão dos genes ALS3, HWP1, BCR1, TEC1, CPH1 e EFG1 de Candida albicans em biofilmes após inativação fotodinâmica
Publication year: 2017
Theses and dissertations in Portugués presented to the Universidade Estadual Paulista (Unesp), Instituto de Ciência e Tecnologia de São José dos Campos to obtain the academic title of Doutor. Leader: Jorge, Antonio Olavo Cardoso
Os micro-organismos estão se tornando cada vez mais resistentes aos
antimicrobianos e cepas de Candida albicans resistentes aos antifúngicos tem sido
isoladas, assim, torna-se importante e necessário a realização de pesquisas que
avaliem os efeitos de novos métodos terapêuticos, como a inativação fotodinâmica
antimicrobiana (aPDI). Assim, o objetivo deste estudo foi verificar os efeitos da
inativação fotodinâmica sobre biofilmes de Candida albicans, avaliando seus efeitos
sobre a expressão dos genes TEC1 (fator de transcrição), HWP1 (proteína de parede
celular das hifas), EFG1 (regulador transcricional relacionado com a morfogênese),
BCR1 (regulador da formação de biofilme e da parede celular), CPH1 (regulador
transcricional envolvido na morfogênese) e ALS3 (adesina) de C. albicans. Foram
avaliadas 30 amostras isoladas de pacientes portadores de HIV e 30 amostras de
pacientes com estomatite protética, quanto a produção de biofilme, peso seco e
filamentação. Destas, foram selecionadas as amostras mais virulentas de cada grupo
que apresentaram melhor capacidade de formação de biofilme e filamentação. Assim,
foi utilizada uma amostra clínica de C. albicans isolada de paciente portador de HIV,
uma amostra clínica de C. albicans isolada de paciente com estomatite protética e
uma cepa padrão ATCC 18804. A quantificação da expressão dos genes foi
relacionada à produção desses genes nas amostras clínicas e na cepa de referência
utilizando-se ensaio de PCR em tempo real. Para a aPDI, foram utilizados os
fotossensibilizadores azul de metileno a 300 μM e eritrosina a 400 μM sensibilizados
com laser de Índio-Gálio-Alumínio-Fósforo de baixa potência (vermelho visível, 660
nm) e LED verde (532 ± 10 nm), respectivamente.
Foram avaliados quatro grupos experimentais para a aPDI:
a) F+L+: sensibilização com o corante e irradiação com luz; b) F+L-: somente tratamento com o fotossensibilizador; c) F-L+: somente irradiação com luz e d) F-L-: sem sensibilização com o corante e ausência de luz. Os resultados foram analisados por t-test, com um nível de significância de 5%. Após a análise fenotípica, as amostras Ca30 e 39 S foram selecionadas para a realização da aPDI. Como esperado, apenas para o grupo F+L+, quando comparado com o grupo F-L-, todos os genes analisados foram sub expressos após a aPDI. O fold-decrease para os genes ALS3, HWP1, BCR1, TEC1, CPH1 e EFG1 foram 0,73; 0,39; 0,77; 0,71; 0,67 e 0,60; para laser, respectivamente, e 0,66; 0,61; 0,50; 0,43; 0,54 e 0,66; para LED, respectivamente. Pode-se concluir que a aPDI mostrou uma redução na expressão dos genes de C. albicans, sugerindo a diminuição de sua virulência(AU)
Os micro-organismos estão se tornando cada vez mais resistentes aos
antimicrobianos e cepas de Candida albicans resistentes aos antifúngicos tem sido
isoladas, assim, torna-se importante e necessário a realização de pesquisas que
avaliem os efeitos de novos métodos terapêuticos, como a inativação fotodinâmica
antimicrobiana (aPDI). Assim, o objetivo deste estudo foi verificar os efeitos da
inativação fotodinâmica sobre biofilmes de Candida albicans, avaliando seus efeitos
sobre a expressão dos genes TEC1 (fator de transcrição), HWP1 (proteína de parede
celular das hifas), EFG1 (regulador transcricional relacionado com a morfogênese),
BCR1 (regulador da formação de biofilme e da parede celular), CPH1 (regulador
transcricional envolvido na morfogênese) e ALS3 (adesina) de C. albicans. Foram
avaliadas 30 amostras isoladas de pacientes portadores de HIV e 30 amostras de
pacientes com estomatite protética, quanto a produção de biofilme, peso seco e
filamentação. Destas, foram selecionadas as amostras mais virulentas de cada grupo
que apresentaram melhor capacidade de formação de biofilme e filamentação. Assim,
foi utilizada uma amostra clínica de C. albicans isolada de paciente portador de HIV,
uma amostra clínica de C. albicans isolada de paciente com estomatite protética e
uma cepa padrão ATCC 18804. A quantificação da expressão dos genes foi
relacionada à produção desses genes nas amostras clínicas e na cepa de referência
utilizando-se ensaio de PCR em tempo real. Para a aPDI, foram utilizados os
fotossensibilizadores azul de metileno a 300 μM e eritrosina a 400 μM sensibilizados
com laser de Índio-Gálio-Alumínio-Fósforo de baixa potência (vermelho visível, 660
nm) e LED verde (532 ± 10 nm), respectivamente.