A pirazinamida (PZA) é um medicamento com acção antituberculosa bactericida efectivo no tratamento da Tuberculose (TB). A PZA é convertida a ácido pirazinóico através da enzima pirazinamidase (PZase), codificada pelo gene pncA do Mycobaterium tuberculosis. A PZA tem acção em populações de bacilos em multiplicação lenta que persistem os ambientes com pH ácidos tendo uma actividade esterilizante importante e eficaz contra a prevenção de estirpes resistentes aos medicamentos. A PZA faz parte do tratamento de primeira linha da TB e a sua acção esterilizante levou a redução do tempo de tratamento de 9 meses para o actual regime 6 meses. O objectivo deste estudo foi estimar a frequência de resistência a PZA e caracterizar o tipo de mutações no gene pncA em estirpes de M. tuberculosis associadas a resistência a PZA. Foram incluídos no estudo 71 isolados de M. tuberculosis, dos quais 45 de pacientes com TB multi-resistente e 26 de pacientes com TB-sensível provenientes da área de saúde de Mavalane. Todos os isolados foram submetidos ao teste de sensibilidade a PZA no sistema automatizado BACTEC MIGIT 960. Trinta e dois isolados foram analisados por genotipagem usando o lócus MIRU-VNTR (24-loci mycobacterial-interspersed repetitive-variable-number of-tandem-repeat). Foi encontrada uma taxa de detecção de 52,1% de resistência a PZA, e uma alta correlação entre a multi-resistência e resistência a PZA. Foram sequenciados os genes pncA de 32 isolados e foram encontradas 14 tipos de mutações, 11 das quais associadas a resistência a PZA. A linhagem mais frequente encontrada foi a LAM Latin American Mediteterranean (8/32), e um número grande de estirpes não puderam ser definidas (not defined) (11/32). Mais de metade dos casos de TB-MDR é resistente também a PZA. Os resultados encontrados enfatizam a importância da realização do teste de sensibilidade a PZA antes de se prescrever o medicamento para o tratamento da TB multirresistente em Moçambique.