Avaliação do potencial papel do toxoplasma gondiina encefalite relacionada com infecção pelo HIV em doentes internados no hospital central de Maputo

Francisco, Augusto Magubeia

Toxoplasmose é uma doença parasitária causada por Toxoplasma gondii (T. gondii). O T. gondii, em pacientes imunocompetentes, geralmente causa infecções assintomáticas e latentes. Em doentes imunocomprometidos, a reactivação de toxoplasmose latente no Sistema Nervoso Central (SNC), pode causar doença neurológica fatal. A encefalite toxoplasmática (ET) é a manifestação clínica grave mais importante da toxoplasmose cerebral e é uma das infecções oportunistas neurológicas mais comuns em pacientes HIV-positivos. O estudo tinha como objectivo avaliar o potencial papel do Toxoplasma gondii na encefalite relacionada com infecção pelo HIV no Hospital Central de Maputo. Em Moçambique, o diagnóstico da toxoplasmose cerebral é baseado em critérios clínicos, associados a características radiológicas de imagens do cérebro. O Centro de Prevenção e Controlo de Doenças (CDC) dos Estados Unidos, para o diagnóstico da toxoplasmose cerebral recomenda a identificação do T. gondii na amostra clínica. No estudo, foi aplicada a técnica de PCR para detectar o DNA do T. gondii em amostras de líquido cefalorraquidiano (LCR) colhido em doentes com encefalite internados no Hospital Central de Maputo. O estado de HIV foi confirmado em todos os doentes e foi feita a contagem de células T-CD4 em doentes HIV-positivos. Amostras de LCR foram colhidas por conveniência diagnóstica através da técnica de punção lombar e foram conservadas a -40oC até a data de seu envio para o Laboratório Interdisciplinar de Pesquisas Médicas do Instituto Oswaldo Cruz-FIOCRUZ, no Rio de Janeiro. A extracção do DNA foi feita usando Kit da QIAGEN (QIAamp DNA Mini kit). A PCR foi realizada utilizando um par de iniciadores do gene B1. Os produtos da PCR foram analisados por electroforese com 0,5 mg/ ml de brometo de etídio em gel de agarose a 2 % e tampão tris-borato-EDTA (TBE). A visualização de fragmentos do ADN foi feita sob iluminação UV. De um total de 15 amostras PCR positivas, 8 amostras foram sequenciadas para confirmação de resultados da PCR. Foi padronizada a técnica de PCR-DIG utilizando amostras de Trypanossoma cruzi com iniciadores específicos. Depois da padronização, a técnica de PCR-DIG e a técnica de RFLP foram usadas para determinar genótipos do T. gondii em 15 amostras PCR positivas...

Toxoplasmosis is an infectious disease caused by the parasite Toxoplasma gondii(T. gondii). Insusceptible and immunocompetent individuals, T. gondiicauses asymptomatic and latent infections. In immunocompromised patients, reactivation of latent toxoplasmosis in the central nervous system can cause fatal neurologicaldisease. ToxoplasmicEncephalitisis the most important clinical manifestation of cerebraltoxoplasmosis, beingone of the most common neurological opportunistic infections in HIV-positive patients. The goal of thisstudy was to evaluate the potentialrole ofToxoplasmagondiiencephalitisrelated to HIV infectionin theMaputo Central Hospital. The diagnosis of cerebral toxoplasmosis currently carried out in hospitalsthroughout Mozambique is based on clinical criteria, associated withradiological featuresofbrain imaging. These diagnosis techniques have important flaw since they are suggestive, and lack laboratory confirmation. The Centerfor Disease Control and Prevention (CDC) recommendsthat for definitive diagnosis of cerebral toxoplasmosis, the toxoplasmosis-causing parasites (T. gondii) should be isolated from the clinical samples collected from patients. Therefore, we applied the Polymerase Chain Reaction techniques for detect T. gondiiDNA in cerebrospinal fluids collected frompatientswith encephalitis, with or without HIV infection, admitted at the Hospital Central de Maputo. TheHIV status of each patientwas confirmedfollowing standard proceduresandT-CD4 cell counts was obtained only for HIV-positivepatients. The cerebrospinal fluid was taken by lombar puncture and was stored at-40oC until the transferto the Laboratório Interdisciplinar de PesquisasMédicas of Oswaldo CruzInstitute-FIOCRUZ, Rio de Janeio -Brasil. The extractionof parasites DNA was carried out using theQIAGENkit(QIAamp DNAMiniKit), whilstthe detectionof T.gondiiDNA inclinicalsamples was performedusing PCR techniques with onepair ofoligonucleotides targeted tothe B1geneof T. gondii.The PCR productswere analyzed by electrophoresisin 2 % of agarose geland stained with ethidium bromide(0.5 mg/ml) in tris-borate-EDTA (TBE) buffer. The visualization ofPCR product was done under UV illumination.In total of 15 PCRpositivesamples8 were sequencedto confirmtheresults. ThePCR-DIG wasstandardizedusingTrypanossomacruzisampleswith specific primers. Afterstandardization, thePCR-DIG wasappliedto determinegenotypesof T.gondiiin15samples PCRpositive, also,RFLPwas appliedinPCR positive samples...