Estudo de polimorfismos de tnf,il-10, lta4h, pklre associação com tuberculose na população moçambicana
Ano de publicação: 2013
Teses e dissertações em Português apresentado à Instituto Oswaldo Cruz para obtenção do título de Mestre. Orientador: Morais, Milton Ozorio
A tuberculose é um problema mundial de saúde pública. Estima-se que a tuberculose activa
ocorre em 5-10% dos indivíduos infectados pela Mycobacterium tuberculoses, enquanto os
restantes conseguem conter ou eliminar o patógeno completamente. A chance de uma evolução favorável é regida por factores imunes do organismo infectado e por características do agente agressor (virulência e carga infectante). A resposta imune do hospedeiro é um factor crítico para o desencadeamento da tuberculose e os níveis desta resposta são influenciados por factores genéticos. Variações genéticas em genes ligados directamente ou indirectamente ao sistema imune como o IL-10 TNF,LTA4H já foram estudados e associados a susceptibilidade ao desenvolvimento de tuberculose em várias regiões do mundo. O objectivo deste estudo foi analisar a influência de polimorfismos de base única (SNP) na susceptibilidade à tuberculose na população Moçambicana. Para atingir este objectivo, foi realizado um estudo caso-controlo e analisados polimorfismos dos genes IL-10 (rs1800871),TNF(rs1800629), LTA4H (rs1978331, rs2660898 e rs17525495) de modo a replicar resultados encontrados em outros trabalhos da mesma natureza e do PKLR(rs11264355 e rs11264359) de forma pioneira. Amostras de sangue de 102 pacientes com tuberculose pulmonar e sem HIV (casos) foi colhida em três Unidades Sanitárias da cidade e província de Maputo (Centros de Saúde de Mavalane e Polana Caniço e Hospital Geral da Machava) e 456 Dadores de Sangue no Banco de Sangue do Hospital Central de Maputo (controlos). O DNA genómico foi extraído do sangue total no Laboratório de Imunologia do INS, usando o kit o “QIAamp blood DNA extraction kit”e a genotipagem foi realizada no laboratório de Hanseníase na FIOCRUZ usando um PCR em tempo real, sistema TaqMan® de discriminação alélica do tipo “assay by design” (Life Technologies, USA). Todas as análises foram realizadas usando o software estatístico R para Windows, versão 2.12.0. Com a excepção do SNP LTA4H rs2660898, as frequências genotípicas das variantes alélicas de todos os genes analisados estavam em equilíbrio de Hardy-Weinberg. Observou se que os polimorfismos de PKLR (rs11264355CC e rs11264359AA) e as combinações haplotípicas (rs11264355C/rs11264359A e rs11264355C/rs11264359G) estão associados a
protecção contra o desenvolvimento da tuberculose. O alelo TNF -308A e o genótipos AA estão fortemente associados a susceptibilidade para desenvolvimento da tuberculose. Não foi observada associação entre o SNP IL-10 (rs1800871), LTA4H (rs1978331 e rs17525495) e tuberculose.
Tuberculosis is a worldwide public health problem. Active tuberculosis is estimated to occurs in 5-10% of Mycobacterium tuberculosis infected individuals, while The rest can contain or eliminate the pathogen completely. The chance of one favorable evolution is governed by immune factors of the infected organism and by characteristics of the offending agent (virulence and infective load). The host immune response is a factor trigger for tuberculosis and levels of this response are influenced by genetic factors. Genetic variations in genes linked directly or indirectly to the immune system such as IL-10 TNF, LTA4H have been studied and associated with susceptibility to the development of tuberculosis in various regions of the world. The objective The aim of this study was to analyze the influence of single base polymorphisms (SNP) on susceptibility to tuberculosis in the Mozambican population. To achieve this objective, it has been. A case-control study was carried out and IL-10 gene polymorphisms were analyzed.
(rs1800871), TNF (rs1800629), LTA4H (rs1978331, rs2660898 and rs17525495) in order to replicate results found in other works of the same nature and of the PKLR (rs11264355 and rs11264359) pioneered. Blood samples from 102 patients with pulmonary tuberculosis and without HIV (cases) was collected from three. Maputo city and province (Mavalane and Polana Caniço Health Centers and Hospital
Machava) and 456 Blood Donors at the Blood Bank of the Central Hospital of Maputo (controls). Genomic DNA was extracted from whole blood at the Laboratory of INS immunology using the QIAamp blood DNA extraction kit and genotyping was performed at the Leprosy laboratory at FIOCRUZ using a real-time PCR system. TaqMan® assay by design allelic discrimination (Life Technologies, USA).
All analyzes were performed using the R statistical software for Windows, version 2.12.0. With the exception of SNP LTA4H rs2660898, the genotype frequencies of the variants allelic genes of all analyzed genes were in Hardy-Weinberg equilibrium. Noted that PKLR polymorphisms (rs11264355CC and rs11264359AA) and combinations haplotypes (rs11264355C / rs11264359A and rs11264355C / rs11264359G) are associated with protection against the development of tuberculosis. The TNF-308A allele and the AA genotypes are strongly associated with susceptibility to tuberculosis development. It was not association between SNP IL-10 (rs1800871), LTA4H (rs1978331 and rs17525495) and
tuberculosis.