Prevalência e caracterização molecular de rotavírus em crianças menores de 5 anos com diarreia aguda no distrito de chókwè-moçambique

Ano de publicação: 2013
Teses e dissertações em Português apresentado à Instituto Oswaldo Cruz para obtenção do título de Mestre. Orientador: Leite, José Paulo Gagliandi

A diarréia é uma importante causa de morbidade e mortalidade em todas as regiões do mundo e entre todas as idades, ainda pouco se sabe sobre a fracção de episódios de diarréia e óbitos de cada patógeno. Os rotavírus (RVs) foram designados como principal causa de doença diarréica e desihidratação grave em lactentes e crianças menores de 5 anos de idade. O rotavirus é oblíquo. O pico de incidência da doença ocorre no inverno nos países do climas temperado e durante todo nos países tropicais. Infecção RVA responsavel por causar 527.000 mortes por ano em todo o mundo. Na África RVs é responsável por 20% a 40% de todas as doenças diarreicas em crianças com menos de 60 meses de idade. Além disso, na África Subsaariana a mortalidade associada a RVA foi estimada em 145,000 mortes / ano. Em Moçambique não há dados que reportam os genótipos de rotavírus que ocorrem e sua contribuição na etiologia diarréia. O desenvolvimento de vacinas RVs tornou-se uma prioridade de saúde pública nos últimos anos, duas vacinas contra o rotavírus: Rotarix, (GSK, Rixensart, Bélgica) e pentavalente (Merck, NJ, EUA). Rotarix foi demonstrado ser eficaz na prevenção da doença grave causada por estirpes G1P[8], G3P[8], G4P[8], G9P[8] enquanto pentavalente na prevenção de doença causada por estirpes G1, G3, G4 e G9. Neste estudo propusemos a caracterizar as estirpes de RVA que ocorrem em população selecionada de crianças menores de cinco anos com diarréia aguda residente no distrito de Chókwè, Moçambique. A presença de rotavírus foi rastreada por EIA em 254 amostras, e 24% foram positivas rotavírus. A dsRNA foi extraído da suspensão fecal pelo metodo de sílica. A detecção de RVA foi realizada pela técnica de EPGA resultados obtidos estre os dois métodos demonstrou concordância em 75%. Todas as amostras apresentaram perfil eletroforético longo e compactáveis com rotavírus do grupo A, porém nenhuma infecção mista foi observada. A síntese de cDNA a partir do RNA extraído foi realizada utilizando-se o iniciador randômico contido no Kit High Capacity® (Applied Biosystems, USA), A PCR foi realizada com um pares de iniciadores consensuais para VP4 (4con2/4con3) e VP7 (9con1/9con2) onde os produtos da obtidos foram submetidos a PCR semi-nested multiplex usando iniciadores específicos para os genotipos G e P. As amostras que possiveies ser caracterizadas pelo PCR semi-nested foram submetidos a analise de sequencia. As combinações de genótipos predominantes foram RVA G12P [8] (51%); G1P [8] (19%); G12P [6] (6%). As informações produzidas neste estudo iram subsidiar a importância do monitoramento dos genótipos de rotavírus antes e durante a introdução da vacina contra o rotavírus e reforcara achados dos trabalhos dos países vizinhos da emergencia G12 na África para o qual ainda não existe vacina mostra proteção.
Diarrhea is an important cause of morbidity and mortality in all regions of the world and among all ages, yet little is known about the fraction of diarrhea episodes and deaths due to each pathogen. Rotaviruses (RVs) were designated as leading cause of severe diarrheal disease and dehydration in infants and young children (under 5 years of age) throughout the world and it is oblique. Peak incidence of disease is winter seasonality in temperate climates and year-round exposure in tropical countries. RVs infection causes 527,000 deaths per year worldwide. In Africa only RVs is responsible for 20% to 40% of all diarrheal diseases in children under 60 months of age. Furthermore in sub-Saharan Africa the mortality associated with RVs has been estimated to 145.000 deaths/ year. In Mozambique there is no data available reporting genotypes of rotavirus occurring and its contribution in diarrhea etiology. To overcome the burden caused by RVs disease, the development of RVs vaccines became a public health priority In the past years, two rotavirus vaccines: Rotarix, (GSK, Rixensart, Belgium) and RotaTeq (Merck, NJ, USA). Rotarix has been shown to be effective in the prevention of severe RVs disease caused by G1P8, G3P8, G4P8, G9P8 strains while RotaTeq in prevention of RV disease caused by G1, G3, G4 and G9 strains. We proposed to characterize of the RVs strains occurring in in selected population of children under five years with acute diarrhea resident in Chokwe district, Mozambique. The presence of rotavirus was screened by EIA in 254 sample and 24% were Rotavirus positive. dsRNS was extracted from fecal suspension by silica procedures and the RVs detection was also performed by PAGE results from these two diagnostic methods demonstrated agreement in 75%. All samples were showed electrophoretic profile long and compactable with group A rotavirus. No mixed infection was observed. Complementary DNA was obtained by reverse transcription with random primer. PCR were done with a pair of consensus primers for VP4 (4con2/4con3) or VP7 (9con1/9con2) and the products were submitted to Multiplex semi-nested PCR with specific primers for the G and P. The product of PCR was submitted to sequencing. The predominant combinations RVA genotypes were G12P[8] (51%,); G1P[8] (19%);G12P[6] (6%). The information produced in this study will subside the importance of monitoring rotavirus genotypes before and during introducing rotavirus vaccine and it emphasize the emergence of G12 type in Africa for which there is no vaccine shows protection ye

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