Prevalência e caracterização molecular de rotavírus em crianças menores de 5 anos com diarreia aguda no distrito de chókwè-moçambique
Ano de publicação: 2013
Teses e dissertações em Português apresentado à Instituto Oswaldo Cruz para obtenção do título de Mestre. Orientador: Leite, José Paulo Gagliandi
A diarréia é uma importante causa de morbidade e mortalidade em todas as regiões do
mundo e entre todas as idades, ainda pouco se sabe sobre a fracção de episódios de
diarréia e óbitos de cada patógeno. Os rotavírus (RVs) foram designados como principal
causa de doença diarréica e desihidratação grave em lactentes e crianças menores de 5
anos de idade. O rotavirus é oblíquo. O pico de incidência da doença ocorre no inverno
nos países do climas temperado e durante todo nos países tropicais. Infecção RVA
responsavel por causar 527.000 mortes por ano em todo o mundo. Na África RVs é
responsável por 20% a 40% de todas as doenças diarreicas em crianças com menos de
60 meses de idade. Além disso, na África Subsaariana a mortalidade associada a RVA
foi estimada em 145,000 mortes / ano. Em Moçambique não há dados que reportam os
genótipos de rotavírus que ocorrem e sua contribuição na etiologia diarréia. O
desenvolvimento de vacinas RVs tornou-se uma prioridade de saúde pública nos
últimos anos, duas vacinas contra o rotavírus: Rotarix, (GSK, Rixensart, Bélgica) e
pentavalente (Merck, NJ, EUA). Rotarix foi demonstrado ser eficaz na prevenção da
doença grave causada por estirpes G1P[8], G3P[8], G4P[8], G9P[8] enquanto
pentavalente na prevenção de doença causada por estirpes G1, G3, G4 e G9. Neste
estudo propusemos a caracterizar as estirpes de RVA que ocorrem em população
selecionada de crianças menores de cinco anos com diarréia aguda residente no distrito
de Chókwè, Moçambique. A presença de rotavírus foi rastreada por EIA em 254
amostras, e 24% foram positivas rotavírus. A dsRNA foi extraído da suspensão fecal
pelo metodo de sílica. A detecção de RVA foi realizada pela técnica de EPGA
resultados obtidos estre os dois métodos demonstrou concordância em 75%. Todas as
amostras apresentaram perfil eletroforético longo e compactáveis com rotavírus do
grupo A, porém nenhuma infecção mista foi observada. A síntese de cDNA a partir do
RNA extraído foi realizada utilizando-se o iniciador randômico contido no Kit High
Capacity® (Applied Biosystems, USA), A PCR foi realizada com um pares de
iniciadores consensuais para VP4 (4con2/4con3) e VP7 (9con1/9con2) onde os
produtos da obtidos foram submetidos a PCR semi-nested multiplex usando iniciadores
específicos para os genotipos G e P. As amostras que possiveies ser caracterizadas pelo
PCR semi-nested foram submetidos a analise de sequencia. As combinações de
genótipos predominantes foram RVA G12P [8] (51%); G1P [8] (19%); G12P [6] (6%).
As informações produzidas neste estudo iram subsidiar a importância do monitoramento
dos genótipos de rotavírus antes e durante a introdução da vacina contra o rotavírus e
reforcara achados dos trabalhos dos países vizinhos da emergencia G12 na África para
o qual ainda não existe vacina mostra proteção.
Diarrhea is an important cause of morbidity and mortality in all regions of the
world and among all ages, yet little is known about the fraction of diarrhea episodes and
deaths due to each pathogen. Rotaviruses (RVs) were designated as leading cause of
severe diarrheal disease and dehydration in infants and young children (under 5 years of
age) throughout the world and it is oblique. Peak incidence of disease is winter
seasonality in temperate climates and year-round exposure in tropical countries. RVs
infection causes 527,000 deaths per year worldwide. In Africa only RVs is responsible
for 20% to 40% of all diarrheal diseases in children under 60 months of age.
Furthermore in sub-Saharan Africa the mortality associated with RVs has been
estimated to 145.000 deaths/ year. In Mozambique there is no data available reporting
genotypes of rotavirus occurring and its contribution in diarrhea etiology. To overcome
the burden caused by RVs disease, the development of RVs vaccines became a public
health priority In the past years, two rotavirus vaccines: Rotarix, (GSK, Rixensart,
Belgium) and RotaTeq (Merck, NJ, USA). Rotarix has been shown to be effective in the
prevention of severe RVs disease caused by G1P8, G3P8, G4P8, G9P8 strains while
RotaTeq in prevention of RV disease caused by G1, G3, G4 and G9 strains. We
proposed to characterize of the RVs strains occurring in in selected population of
children under five years with acute diarrhea resident in Chokwe district, Mozambique.
The presence of rotavirus was screened by EIA in 254 sample and 24% were Rotavirus
positive. dsRNS was extracted from fecal suspension by silica procedures and the RVs
detection was also performed by PAGE results from these two diagnostic methods
demonstrated agreement in 75%. All samples were showed electrophoretic profile long
and compactable with group A rotavirus. No mixed infection was observed.
Complementary DNA was obtained by reverse transcription with random primer. PCR
were done with a pair of consensus primers for VP4 (4con2/4con3) or VP7
(9con1/9con2) and the products were submitted to Multiplex semi-nested PCR with
specific primers for the G and P. The product of PCR was submitted to sequencing. The
predominant combinations RVA genotypes were G12P[8] (51%,); G1P[8]
(19%);G12P[6] (6%). The information produced in this study will subside the
importance of monitoring rotavirus genotypes before and during introducing rotavirus
vaccine and it emphasize the emergence of G12 type in Africa for which there is no
vaccine shows protection ye